肝星状细胞自噬水平与细胞增殖、凋亡水平的相关性研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：416522612034南昌大学专业学位研究生学位论文肝星状细胞自噬水平与细胞增殖、凋亡水平的相关性研究TheRoleofautophagyinHumanstellatecell-T6Growthandapoptosis钟佳培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：杜芳腾教授主任医师专业学位种类：临床医学专业领域名称：内科学（消化系疾病）论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：何明评阅人：陈建勇刘丹2015年5月一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标

2、注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：钟佳签字日期：2015年06月09日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份

3、有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：钟佳导师签名（手写）：杜芳腾签字日期：2015年06月09日签字日期：2015年06月09日论文题目肝星状细胞自噬水平与细胞增殖、凋亡水平的相关性研究姓名钟佳学号416522612034论文级别博士□硕士√院/系/所南昌大学医学部专业内科学（消化）E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：探讨3-甲基腺嘌呤（3

4、-methyladenine,3-MA）抑制大鼠肝星状细胞（HSC-T6）自噬后对HSC-T6细胞活化、增殖、凋亡、周期的影响及可能的作用机制。方法：体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6，用不同浓度的3-MA处理，分为四个实验组，即空白对照组（0.0mmol/l），低浓度组（2.5mmol/l），中浓度组（5.0mmol/l），高浓度组（10.0mmol/l）。用MTT法观察细胞增殖活力；用流式细胞技术检测4组细胞的周期和凋亡情况；用蛋白印迹法（Westernblot）分析不同浓度3-MA作用下各组HSC-T6细胞活化标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬标志蛋白LC3Ⅱ、细胞周期

5、蛋白CyclinA、CyclinB1以及凋亡关键调节蛋白Bcl-2、BAX的表达变化。结果：不同浓度的3-MA作用于HSC-T6细胞24h后，3-MA实验组的HSC-T6细胞增殖明显受到抑制，细胞凋亡率逐渐增高（均P<0.05）；S期及G2/M期细胞比例均明显增加（均P<0.05）；Westernblot显示加入3-MA处理后HCS-T6细胞LC3Ⅱ、α-SMA、CyclinA、CyclinB1、Bcl-2表达量均逐渐下降（均P<0.05），BAX表达量逐渐上调（P<0.05）。结论：（1）自噬抑制剂3-MA下调HSC-T6细胞的自噬水平，抑制LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化，同时抑制HSCs

6、的增殖和活化效应；（2）3-MA抑制HSC-T6细胞自噬后可分别通过下调CyclinA、CyclinB1蛋白水平诱导HSCs细胞周期阻滞在S期、G2/M期；(3)3-MA抑制HSC-T6细胞自噬后可通过上调促凋亡蛋白BAX表达和下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，升高BAX/Bcl-2的比率而诱导HSC-T6细胞凋亡。关键词：3-甲基腺嘌呤；肝星状细胞；CyclinA、CyclinB1、BAX、Bcl-2基因IIAbstractABSTRACTObjective:Toinvestigatetheinfluenceintheactivation,proliferation,cycleand

7、apoptosisofhepaticstellatecellsandtheunderlyingmolecularmechanismafterdifferentconcentrationsof3-methyladenine(3-MA)treathepaticstellatecellsinvitro.Methods:Preparatedifferentconcentrationsof3-MAandtreathepaticstellatecells.Therea