对a431细胞经典自噬水平的初步研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文研究生姓名_________________张云指导教师姓名_________________座_^______专业名称__________皮肤病与性病学研究方向____________光相关皮肤病论文提交日期______________2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其他教

2、育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个体和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：JkL日期：M•丄学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印

3、或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文□本学位论文属在_____年_月解密后适用本规定。非涉密论文□对A431细胞经典自噬水平的初步研究中文摘要对A431细胞经典自噬水平的初步研究中文摘要目的：探讨经典自噬诱导剂雷帕霉素和饥饿处理对A431细胞自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和HeLa细胞设置为对照组、DMSO组、20nM雷帕霉素组、80nM雷帕霉素组、EBSS组。免疫印迹法（WesternBlotting）检测A431细胞和HeLa细胞自噬相关蛋

4、白LC3A/B、GAPDH、GABARAP的表达水平。吖啶橙（acridineorange,AO）染色观察不同处理后A431细胞、HeLa细胞自噬体表达水平。结果：westernblot结果显示HeLa细胞的对照组与DMSO组中LC3II/LC3I的比值相一致，无统计学意义（P>0.05）；20nM雷帕霉素、80nM雷帕霉素、EBSS的LC3II/LC3I比值比较对照组明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。A431细胞的对照组与DMSO组中LC3II/LC3I的比值无明显变化，差异无统计学意义（P>0.0

5、5）；20nM雷帕霉素、80nM雷帕霉素、EBSS的LC3II/LC3I比值跟对照组相比明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。通过SPSS将HeLa、A431细胞的GABARAP、LC3I和LC3II进行双变量的相关性分析。结果显示HeLa细胞的LC3I型与GABARAP的pearson相关性为0.669，说明LC3I和GABARAP为正相关。LC3II型与GABARAP的pearson相关性为-0.742，说明负相关。A431细胞LC3I型与GABARAP的pearson相关性为0.837，说明LC3I

6、和GABARAP为正相关。LC3II型与GABARAP的pearson相关性为-0.184，说明负相关。HeLa细胞吖啶橙染色后在显微镜下观察，可见雷帕霉素组（33.307%±0.715%）跟对照组（14.117%±0.295%）相比自噬阳性细胞率明显增高（P<0.05）；EBSS组（66.097%±1.141%）跟对照组相比，自噬阳性细胞率明显增高（P<0.05）。A431细胞雷帕霉素组（23.750%±0.260%）与对照组（15.987%±0.242%）比较，自噬阳性细胞率明显增高（P<0.05）；EBS

7、S组（32.450%±0.488%）跟对照组比较，自噬阳性细胞率同样增高（P<0.05）。结论：经典自噬诱导剂雷帕霉素和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平，通过相关性分析GABARAP蛋白可能与LC3高度相关。关键词：自噬；A431；GABARAP作者：张云指导教师：施辛IAbstract对A431细胞经典自噬水平的初步研究Theclassicalautophagylevelsofhumansquamouscellcarcinoma(A431):apreliminarystudyAbstractObjectiv

8、e:Toinvestigatetheeffectsofautophagyinducedbytheclassicalinducerofrapamycinandstarvationinhumansquamouscellcarcinoma(A431).Methods:A431andHeLacellswererespectivelyclassifiedinto5groupstoremainun