坏死梭杆菌犉()荦犃型毒力株保护性抗原筛选及初步鉴定

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1、畜牧兽医学报２００８，３９（７）：９３０９３４犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪坏死梭杆菌犉犖（犃）型毒力株保护性抗原筛选及初步鉴定苗利光１，杨福合１，刘艳环１，王志刚１，李艳１，王克坚２，肖佳美１（１．中国农业科学院特产研究所，吉林１３２１０９；２．厦门大学环境科学研究中心／海洋环境科学教育部重点实验室，厦门３６１００５）摘要：通过胰蛋白酶裂解坏死梭杆菌ＦＮ（Ａ）型毒力菌株菌体，分别以菌体裂解物上清和沉淀作为抗原免疫家兔制备血清。利用ＳＤＳＰＡＧＥ／Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术在菌体中筛选出４种

2、具有免疫原性的组分，通过免疫后的攻毒试验，筛选出１种具有免疫保护性的抗原。抗原分离纯化后，进行Ｎ端氨基酸序列测定、免疫试验及生物学特性研究，据试验结果可初步判定该抗原为溶血素类似物或一种新发现的抗原物质。该抗原不仅能使机体产生保护性免疫反应，而且不同菌株中此种抗原间可产生明显的交叉免疫。关键词：坏死梭杆菌；保护性抗原；筛选中图分类号：Ｓ８５２．６文献标识码：Ａ文章编号：０３６６６９６４（２００８）０７０９３００５犘狉狅狋犲犮狋犻狏犲犃狀狋犻犵犲狀狊犳狉狅犿犞犻狉狌犾犲狀狋犐狊狅犾犪狋犲狊狅犳犉狌狊狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狀犲犮狉狅狆犺

3、狅狉狌犿犉犖（犃）１，ＹＡＮＧＦｕｈｅ１，ＬＩＵＹａｎｈｕａｎ１，ＷＡＮＧＺｈｉｇａｎｇ１，ＭＩＡＯＬｉｇｕａｎｇ１，ＷＡＮＧＫｅｊｉａｎ２，ＸＩＡＯＪｉａｍｅｉ１ＬＩＹａｎ（１．犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犛狆犲犮犻犪犾犠犻犾犱犈犮狅狀狅犿犻犮犃狀犻犿犪犾犪狀犱犘犾犪狀狋犛犮犻犲狀犮犲狊，犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊，犑犻犾犻狀１３２１０９，犆犺犻狀犪；２．犈狀狏犻狉狅狀犿犲狀狋犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊犚犲狊犲犪狉犮犺犆犲狀狋犲狉，犚犲狊犲犪狉犮犺犔犪犫狅犳犛犈犇犆狅犳犕犪狉犻狀犲犈狀狏

4、犻狉狅狀犿犲狀狋，犡犻犪犿犲狀犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犡犻犪犿犲狀３６１００５，犆犺犻狀犪）犃犫狊狋狉犪犮狋：ＡｖｉｒｕｌｅｎｔｉｓｏｌａｔｅｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｕｍＦＮ（Ａ）ｗａｓｌｙｓｅｄｗｉｔｈｔｒｙｐｓｉｎ．ＳｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓａｎｄｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｓｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｐｒｅｐａｒｅａｎｔｉＦＮｓｅｒｕｍｂｙｉｍｍｕｎｉｚｉｎｇｒａｂｂｉｔｓ．ＦｏｕｒｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｕｓｉｎｇＳＤＳＰＡＧＥ／Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｉ

5、ｍｍｕｎｉｚｅｄｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ，ａｎｄｏｎｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｎｔｉｇｅｎｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄ．Ａｆｔｅｒａｎｔｉｇｅｎｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅＮｔｅｒｍｉｎａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｎｄａｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｓｔａｎｄｈｅｍｏｌｙｓｉｓｔｅｓｔｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｉｓａｎｔｉｇｅｎｉｓｅｉｔｈｅｒａｈｅｍｏｌｙｓｉｎａｎａｌｏｇｕｅｏｒａｎｅｗａｎｔｉｇｅｎｉｃ

6、ｓｕｂｓｔａｎｃｅ．Ｔｈｅａｎｔｉｇｅｎｗａｓａｂｌｅｔｏｉｎｄｕｃｅａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅａｓｗｅｌｌａｓｇｅｎｅｒａｔｅａｍａｒｋｅｄｃｒｏｓｓｉｍｍｕｎｅｒｅａｃｔｉｏｎａｍｏｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎｓ．犓犲狔狑狅狉犱狊：犉狌狊狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狀犲犮狉狅狆犺狅狉狌犿；ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｎｔｉｇｅｎ；ｓｃｒｅｅｎ坏死梭杆菌属革兰氏阴性、无芽孢、多形性厌氧一直期望能通过疫苗免疫来防治坏死梭杆菌病。研微生物，为动物和人消化道中常在的条件性致病菌，制坏死梭杆菌病疫苗的关键问

7、题是找到保护性抗［１］可引起多种坏死病，常造成牛的肝脓肿、反刍动物原。为此，国内外学者曾作过许多这方面的研［２］［３４］［５７］的肢蹄病、人的口腔及咽喉感染。坏死梭杆菌究，他们通过利用完整菌体、菌体裂解物及菌体病多年来一直是反刍动物养殖业中的重大疾病，由代谢产物进行免疫研究。但由于坏死梭杆菌免疫成于该病临床治疗效果不佳，且反复发作。所以，人们分复杂，免疫效果不稳定，所得结论也不一致。作者收稿日期：２００７０７１１基金项目：国家科技部奶牛专项（２００２ＢＡ５１８Ａ０４）；中国农业科学院特产研究所科研基金项目（ｔｃｓ２００４１）作

8、者简介：苗利光（１９６６），男，吉林集安人，副研究员，博士，主要从事动物细菌分子生物学和免疫学研究，Ｅｍａｉｌ：ｍｌｉｇｕａｎｇ６６＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ通讯作者：杨福合（１９５６），男，河北博野人，研