猪多杀性巴氏杆菌保护性抗原筛选

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2、ｅｅｎｉｎｏｆＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＡｎ村ｅｎｓａａｉｎｓｔｇｇｇＰａｓｔｅｕｒｅＵａｍｕｌｔｏｃｉｄａｆｒｏｍＳｗｉｎｅ研究生姓名郝杰指导教师余兴龙教授学科专业预防兽医学研究方向分子生物学与免疫学论文答辩日期知ｒｕ、翰矮Ｓ会端却為＾秦振论文评阅人喪ｆ心；絮藻冬讀，吁和商哥二０—五年五月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导教师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，，论。尽我所知除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的

3、学位或证一书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究巧做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。知《研究生签名：时间：／王年＾月日关于论文使用授权的说明：本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权保留，允许论文被查阅和借阅送交论文的复印件和磁盘，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同意将由此产生的收益捐赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）＾研究生签名：时间：年月《

4、日指导教师签名；时间：心作年日毒參化啤摘要摘要一种能够引起猪肺疫多杀性己氏杆菌是、多杀性己民杆菌肺炎的病原，并且也是一一猪萎缩性鼻炎的主要病原之。为了能够研制出种有效的多杀性己氏杆菌疫苗，本５ＩＤＢ、ＯｍＨ、ＰＰ试验筛选了５个位于外膜的基因，这个基因分别是Ｎｌｐ、ａｍｐｌｐ和５ＥＴ－２８ａＦａｂＡ。将送＋中，ＥＴ２８Ｎ个基因插入至表达载体ｐ成功获得了重组质粒ｌＩ、（）ｐｐｐＥＴ２８ＢａｍＤ、ｐＥＴ２８０ｍｐＨ、ｐＥＴ２８ＰｌｐＰ和ｐＥＴ２８ＦａｂＡ；通过测序结果，对获得的基因序列进行生物信息学分析，发现克隆获得的基因在不同多杀性

5、己氏杆菌菌株的相同基因之间的保守性很高。将转化了重组质粒的重组表达茜进行原核表达。结果可知阳Ｔ２８ＰｌｐＰ和ｐＥＴ２８扣ｂＡ蛋白主要Ｗ可溶性蛋白的形式存在，而ｐＥＴ２８ＮｌｐＩ、ｐＥＴ２８ＢａｍＤ和ｐＥＴ２８０ｍｐＨ主要Ｗ包涵体的形式存在。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果表明所获得的重组蛋白均具有一定的反应原性。为了研究获得的重组蛋白能否诱导小鼠机体产生高水平的特异性抗体，同时产生的特异性抗体能否为小聞提供同型的攻毒保护。将纯化的重组蛋白与铅胶佐剂进行海。合，制备成了重组亚单位疫苗随机挑选了Ｋｍ系雌性小鼠，并使用已制备好的重组亚单位疫苗免疫小鼠。

6、利用间接ＥＬＩＳＡ法检测实验组小鼠两次免疫后１３ｄ的血清抗体水平，，结果发现：二免后１３ｄ，除了阴性对照组外其他实验组的小鼠抗体水平都有所一升高，３９。二免后１４ｄ用定剂量的多杀性己氏杆菌ＣＶＣＣ４株对所有小鼠进行攻毒。Ｎ一试验表明ｌｐＩ、ＢａｍＤ、ＯｍＨ、ＰｌＰ和ＦａｂＡ蛋白能够为小贏提供定的同型保护，ｐｐ其中ＰｌｐＰ和Ｆ化Ａ蛋白的保护性最高，达到了６６．６７％。为了研究这几个蛋白在不同英膜抗原血清型之间是否具有交叉保护性，随机挑选－了ＫＭ雌鼠，用制备好的弗氏佐剂疫苗免疫小鼠，二免后４ｄ对１免疫小鼠分别攻ｔＵ定量的多杀性臣民杆菌ＣＶＣＣ

7、４４４、ＣＶＣＣ４３４和ＣＶＣＣ４３９株活菌，并观察攻毒保护Ｐ蛋白能ＦａｂＡ也结果。攻毒保护试验结果表明Ｐｌｐ够提供较好的交叉保护性，另外能。够为小鼠提供较好的交叉保护性，而其他蛋白有的只能提供微弱的交叉保护性关键词：多杀性己氏杆菌；原核表达；交叉免疫保护性ＩＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔｒａｃｔＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕＵｏｃｉｄａ，ａｐａｔｈｏｇｅｎｗｈｉｃｈｃａｕｓｅｓｐｉｇｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅａｎｄｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ＂．ｚｗ／／（化／ｔ／ａｎｅｕｍｏｎ