口服表达幽门螺杆菌抗原的重级乳酸乳球菌对小鼠免疫保护作用

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityfortheDegreeofMasterImmunereactionandprotectiveefficacyinmiceoforalrecombinantLactococcuslactismixedantigensofHelicobacterpyloriByQingfengShiSupervisor：Prof．GuangcaiDuanAssociateProf．RongguangZhangEoidemiologyandBiost

2、atisticsE01demlolot5lostatIStlCSCollegeofPublicHealthMav2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：乏震手日期：多D年j月ZjEt学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属

3、郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：之饼日期：乃侈年j月刁日摘要目的对本课题组前期构建好的H．pylori重组疫苗菌株进行验证、诱导、表达。

4、通过口服灌胃免疫接种BALB／c小鼠，连续免疫一个月后，用H．pylori国际标准株11637进行攻击，检Nd,鼠胃内H．pylori定植量，评价不同疫苗所产生的免疫应答和免疫保护效果。方法1．将过夜培养好的乳酸菌NZ3900／pNZ8110一ureB、NZ3900／pNZ8110-lpp20、NZ3900／pNZ810一omp22-幻aA、NZ3900／pNZ8149一ureB、NZ3900／pNZ810·LysM一印aA、NZ3900／pNZ8149．SPusp45-ureBnisin诱导表达，离心

5、提取相关蛋白，经SDS．PAGE电泳鉴定重组菌免疫蛋白表达水平，Western-blot鉴定重组蛋白免疫反应性。2．将过夜培养好的基因工程重组菌TBl(pMAL—c2X．ureB)、TBl(pMAL—c2X一细aA)、TB1(pMAL—c2X—lpp20)、TB1(pMAL-c2X-omp22)IPTG诱导表达超声破碎提取上清蛋白，经SDS．PAGE验证后，应用直链淀粉亲和层析柱进行纯化，使用BCA蛋白定量试剂盒测定纯化蛋白的浓度。3．将BALB／c小鼠随机分为9组，口服免疫后，收集一半小鼠的血清和胃液

6、，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测特异性抗体含量水平。剩下小鼠用H．pylori进行灌胃攻击，2周后处死小鼠，取小鼠胃组织做尿素酶半定量实验。4．统计学分析应用SPSSl7．0进行统计分析。各组资料进行正态性检验后，采用单因素方差分析对各组之间保护率进行评价。结果1．SDS．PAGE胶照片显示Nisin诱导重组蛋白Lpp20、UreB、Omp22-HpaA、LysM-HpaA分别在19kd、66kd、53kd、29kd处显示杂交条带，Western—blot显示各重组蛋白均有良好的免疫原性和免疫反应

7、性。2．各基因工程重组菌诱导表达经直链淀粉亲和层析柱纯化后，SDS．PAGE显摘要示在相应条带均有杂交条带。3．BALB／e小鼠口服灌胃后，NZ3900／pNZ810-LysM-hpaA组血清IgG含量最高，其余各重组菌株组均高于阴性对照组(P

8、Z3900／pNZ8110-LysM-hpaA所引起免疫保护效果最佳关键词幽门螺杆菌乳酸乳球菌口服疫苗免疫保护Abstract0bjectivesInpresentstudy，weaimedtoinduceandexpresstherecombinantvaccineandoralgavageBALB／emiceforamonth，thenuseH．pyloriinternationalstandardstrains1637challeng