口服含pmg36ep30重组质粒的乳酸乳球菌对小鼠免疫应答的影响

《口服含pmg36ep30重组质粒的乳酸乳球菌对小鼠免疫应答的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、口服含pMG36EP30重组质粒的乳酸乳球菌对小鼠免疫应答的影响【摘要】目的用含pMG36EP30重组质粒的乳酸乳球菌口服免疫小鼠，观察其所诱导的小鼠细胞及体液免疫类型。方法BABL/C小鼠随机分成疫苗免疫组、乳球菌对照组、生理盐水组，每次分别饲喂5×109个悬浮在缓冲液中的重组乳酸乳球菌、不含重组质粒的乳酸乳球菌及等体积生理盐水。于第27、34及48天从鼠尾静脉取血，分离血清，ELISA法检测免疫球蛋白G(IgG)、γ干扰素（INFγ）、白细胞介素4（IL4）水平。结果疫苗免疫组IgG水平与乳球菌对照组、生理盐水组比较差异有显著性（F=134.97,q=20.33、19.9

2、0,P<0.01）。疫苗免疫组INFγ、IL4水平与生理盐水组及乳球菌对照组比较差异均有显著意义(F=79.20、17.05，q=6.18～16.79，P<0.01)。结论该口服疫苗能引起小鼠特异性的体液免疫反应并能促进细胞免疫应答。【关键词】乳酸乳球菌pMG36EP30重组质粒免疫测定小鼠［ABSTRACT］ObjectiveTostudythechangesofimmuneresponseinmiceafteroralvaccinationagondii.MethodsSixtoeighticelydividedintothreegroups:vacci

3、natedgroup,nonvaccinatedcontrolgroup,normalsalinegroup.Theyalsaline(salinegroup).SerumsamplesofimmunizedmiceeasuredofimmunizedmiceshomunizationoralimmunityofmiceandenhancedTh1immunityresponse.［KEYG36EP30;immunoassay;rats乳酸口服疫苗使用安全方便，可诱导机体的体液和细胞免疫，同时能够诱导黏膜免疫[1～3]。本研究用含重组质粒pMG36EP30的乳酸乳球菌口服免疫

4、小鼠，观察该口服疫苗对小鼠免疫应答的影响。1材料和方法1.1菌株含pMG36EP30重组质粒的乳酸乳球菌由南华大学寄生虫学教研室提供。1.2试剂小鼠γ干扰素（INFγ）、白细胞介素4（IL4）检测试剂盒及HRP羊抗鼠IgG购自晶美公司，其余试剂均为国产分析纯产品。1.3实验动物健康雌性BABL/C小鼠60只，体质量为（18±1）g，由中国科学院上海实验动物中心提供。随机分成疫苗免疫组、乳球菌对照组、生理盐水组，每组20只小鼠。1.4口服免疫方法疫苗免疫组于第1、2、3、28、29、30、35天每次饲喂5×109个悬浮在缓冲液中含pMG36EP30重组质粒的乳酸乳球菌，乳球

5、菌对照组相同时间饲喂同量不含重组质粒的乳酸乳球菌，生理盐水组饲喂同等体积的生理盐水，口服免疫方法见文献[1、2]。分别在第27、34、48天从鼠尾静脉取血，分离血清，置20℃保存。1.5小鼠血清IgG检测以纯化复性后的P30蛋白(5mg/L)100μL于4℃包板过夜，次日去包被液，用0.5g/LTBST洗板3次,含50g/L脱脂奶粉的TBST封闭1h,再以0.5g/LTBST洗板3次。加50μL1∶50稀释的小鼠血清,2h后，0.5g/LTBST洗板3次,加1∶1000稀释的HRP羊抗鼠IgG反应1h,0.5g/LTBST洗板5次,每孔加入50μLTMB，37℃显色5～10min

6、,每孔加入2mol/LH2SO450μL终止反应,酶标仪检测波长490nm处的吸光度（A）值。疫苗免疫组IgG水平与乳球菌对照组、生理盐水组比较差异有显著意义（F=134.97,q=20.33、19.90,P<0.01）；生理盐水组与乳球菌对照组比较差异无显著性（q=0.42,P>0.05）。见表1。2.2各组细胞因子的测定疫苗免疫组INFγ、IL4水平与生理盐水组及乳球菌对照组比较，差异均有显著意义(F=79.20、17.05，q=6.18～16.79，P<0.01)。　　3讨论含乳酸菌的口服疫苗由于可诱导黏膜免疫应答，所以特别适合用于研制抵抗经黏膜侵入宿主

7、的病原体疫苗。乳酸菌具有佐剂作用，这也是乳酸口服疫苗的另一个优点[3]。Th1细胞多分泌IFNγ、IL2，与Tc细胞的增殖、分化、成熟有关，因此Th1细胞可促进细胞介导的免疫应答，Th2细胞多分泌IL4、IL5、IL6、IL10，与B细胞增殖、成熟和促进抗体生成有关，故可增强抗体介导的免疫应答。通过检测由Th1和Th2细胞分泌的细胞因子、特异性表1各组血清中特异性抗P30IgG水平比较表2各组血清中INFγ、IL4的检测结果比较IgG，可以分析该口服疫