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1、新疆农业科学2011,48(4):734-738XinjiangAgriculturalSciences乳酸乳球菌质粒提取方法的改进与优化任志娟,李轶杰,马正海(新疆生物资源基因工程重点实验室,新疆大学生命科学与技术学院,乌鲁木齐830046)摘要:目的建立一种简便、快速、安全的乳酸乳球菌质粒提取方法。方法质粒提取采用文献报道的乳酸菌质粒提取与常用的大肠杆菌质粒提取相结合的方法,并对提取过程中溶菌酶浓度、溶菌酶处理方式和时间进行优化。结果采用改良后的方法提取乳酸菌质粒效果显著。最佳溶菌酶
2、浓度是10mg/mL,最佳溶菌酶处理方式和时间是37振荡培养30min。结论该方法避免了毒性物质溴化乙锭的使用,同时减少了通常提取乳酸菌质粒的复杂步骤,是一种高效、快速、安全的提取乳酸菌质粒的方法。关键词:乳酸菌;质粒;提取;溶菌酶+中图分类号:S188.4文献标识码:A文章编号:1001-4330(2011)04-0734-05ImprovementandOptimizationofAMethodforExtractionofPlasmidfromLactococcuslactisRENZhi-juan,LIYi-jie,MAZheng-h
3、ai(XinjiangKeyLaboratoryofBiologicalResourcesandGeneticEngineering,CollegeofLifeScienceandTechnology,XinjiangUniversity,Urumqi830046,China)Abstract:ObjectiveTodevelopasimple,rapidandsafemethodforextractionofplasmidDNAfromLactococcuslactis.MethodThemethodforplasmidextractionfroml
4、acticacidbacteriawasimprovedbycombiningthemethodofE.coliplasmidextractionandthereportedmethodofplasmidextractionfromlacticacidbacteria(LAB).Conditionsforthisnewmethodwereoptimizedintermsoflysozymeconcentrationandlysozymetreatmentwayandtimelength..ResultTheoptimalconcentrationoflys
5、ozymewas10mg/ml,theoptimallysozymetreatmentmethodandtimewereat37for30minwithshaking.ConclusionThismethodavoidedtheuseofethidiumbromide(EB)andsimplifiedthecomplicatedprocedure,soitwasahigheffectiveandsafeLABplasmidDNAextractionmethod.Keywords:Lactococcuslactis;plasmid;extraction;l
6、ysozyme0引言[1]研究意义乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB)是正常存在于人和动物胃肠道中的菌群。其中绝大部分都是人体内必不可少且具有重要生理功能的益生菌。乳酸菌已被广泛应用于食品生产,并且通常[2]被认为是安全的(generally-regarded-as-safe,GRAS)食品级微生物。以乳酸乳球菌为材料探讨快速、安全、简单的提取乳酸菌质粒的方法,为乳酸菌分子生物学和遗传学的进一步研究奠定基础。前人研究进展近年来,随着乳酸菌内源性质粒的去除,以及对各类表达信号的分离和克隆等方法的研究,已[3]建立了一系列乳酸菌克隆载体
7、、表达载体、选择标记和突变系统等。LAB食品级基因表达系统的构建[4][5]已经成为近年来的研究热点。目前可用于食品级基因表达系统构建的主要有乳酸乳球菌,乳酸杆[6]菌等。在筛选重组乳酸菌时,需要一种简单快捷的乳酸菌质粒提取方法,以便对重组菌进行鉴定。[7]1983年,Anderson等提出了利用溶菌酶破坏细胞壁结构提取乳酸菌质粒的方法,并且成功地提取了乳[8][9]酸链球菌质粒,但是该方法步骤繁琐、操作复杂、耗时长;1993年OSullivan等提出了提取乳酸菌质收稿日期:2011-03-03基金项目:国家自然科学基金项目(30860265);新疆生物资源
8、基因工程重点实验室基金(XJDX020
