胞壁型重组BCG的构建及对小鼠免疫应答的影响

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1、第四军医大学博士学位论文胞壁型重组BCG的构建及对小鼠免疫应答的影响姓名：史皆然申请学位级别：博士专业：内科学（呼吸系病）指导教师：戚好文;李元2003.3.1猿麓精赢_X吨≮sl秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本A声明所呈交的论文是我1在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特卸以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他^已经发表或撰写过的研究成不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的隔对本研究所撇的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作

2、者签名：-生兰三!兰!日期l≯麓蠢声麓嘉_)棚)31略一，本A完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校功学位期问论文I作的知识产权单位属第四军医大学。本A保证毕业离校后，表论文或使用论文I作成果时署名单位仍然为第四军医大学。学校有权保留”1交论文的复印件，允许论文被查阅和借闲；学校可以公布论文的全部或部分容(保密内容除，})，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。㈣粼：坦嗍名：牝啡型筵嚣攀罴大学麟±学垃论文英文缠篝英文缩写词表英文缓写英文全称中文译名AbAntibody抗体ADCAlbmninDextroseCatalasesolu

3、tion鑫豢叁蘸甓耱溶液BCGBacillusCalmetteGuerin卡介苗bpBasePair碱蘩对BSABovineSerumAlbumin牛也清白蛋白CDClusterofDifferentiation细胞分化抗原CFUColonyFormingUnits克隧髟残罄位DAB3，3．Diaminobenzidine二氨基联苯胺Derp2DermatophagoidesProteinIIgroup尘媛蛋鑫2缝dNTPDeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核昔三磷酸DTHDelayed—typehypersensiti

4、vity迟发型超敏反应ELISAEnzyme-linkedImmunosorbent酶联免疫吸嫩试验AssayFCSFetalCalfSerum胎牛血清FITCFluoresceinIsothiocyanate异硫鬣酸荧光素HDMHousedustmite屋尘螨HIVHumanimmunodeficiencyvirus入获得性兔疫缺陷病蜷HRPHorseradishPeroxidase辣报过氧化物酶IFN。YInterferon。Yy，干扰素IgEImmunogIobulin若，受瘦稼蛋塞EILInterleukin白细胞介素蕊匪军驻大学撩士学位论文英文

5、缩写{Pl毪kDa醚．≈口cc8emAbMT转OD0PDPBSPERN熬eR，■PCRSCCSTC廷ThTNF}A嚣毒辩嚣基巯化w§-D．半疑赣蜚午遵尔顿糙串分校耔滚肇竟隧挠舔结核分棱秆麓光密度邻零二骏磷酸麓缓冲液藻红蛋白挟耱楼酸酶多聚酶链反臌辟细胞培养上渣T缨臆菝嚣受髂辅助性T细胞辩漕嚣死逸予熬每含氮碱基一～～一一一一一一一一～一一一一一第四军医大学博士学位论文；；；=；；j====；；；；；；=；===；；=；=；；；；；；；；；；；；；；；高；；；；；；；=i中文摘要胞壁型重组BCG的构建及对小鼠免疫应答的影响博士研究生史皆然导师戚好文教授辅导教师

6、李元副教授摘要～背景根据分泌细胞因子的差异，CD4+T细胞可分被为Thl和Th2＼两个亚群。正常情况下，Thl／Th2之间保持着稳定的平衡。许多疾病与Thl／Th2失衡密切相关。Thl／Th2的分化受到体内外许多因素的调节，外来抗原通过抗原递呈细胞(APC)有效地影响Thl／Th2分化。分枝杆菌感染所引起的机体免疫应答是以Thl样反应为主的免疫应答，BCG是迄今为止最安全、最稳定的疫苗。通过基因工程手段获得重组BCG，可以调节Thl／Th2平衡，有望成为相关疾病治疗的新途径。U目的、以屋尘螨抗原Derp2为目标，利用基因工程手段制备以胞壁嵌合形式表达的重

7、组BCG，观察接种该重组BCG对BALB／c小鼠免疫应答的影响。r(方法采用基因分段合成连接方法，构建并改造完整的Derp2基第四军医大学博士学位论文中文摘要因；通过载体pProExHb介导Derp2在大肠杆菌中初步表达；以巴斯德毕赤酵母(PichiaPastoris)作为真核表达系统，利用整合型表达质粒pPIC9K，将Derp2基因整合入毕赤酵母的染色体中，G418压力筛选高效表达重组体，用ELISA法测定其抗原性；利用PCR从结核分枝杆菌毒株H37Rv的基因组中扩增并克隆19kDa抗原胞壁区及其上游调控元件(19．ss)基因，克隆入E．coli．BC

8、G穿梭载体pOLYG，构建能携带外源蛋白并在分枝杆菌宿主胞壁上表达的载体pCW；