共刺激分子cd137l对hbsag重组疫苗诱导小鼠免疫应答的佐剂作用

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1、基剖邀佥王￡墅里圣ZL殖塾垦曼△g重组疫苴透昱丛∑鼠论文作者签名：lz．当竺指导教师签名：论文评阅人1：评阅入2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：．盗丛盆委员1：呈选蛐：委员2：委员3：委员4．．逝基．委员5：杭州师范大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得揎趟．竖莲盘堂．或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作

2、了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：■识≯’签字日期：i劢／≯年j-月。。冶日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解揎艄垣整盘鲎有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权揎刿竖基盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：丁沙寥砂导师签名：签字日期：冽≯年上月形日签字日期：日努月锈¨巍加杭州师范大学硕士学位论文共刺激分子CDl37L对}msAg重组疫苗诱

3、导小鼠免疫应答的佐剂作用致谢首先，衷心感谢我的导师黄茵教授，无论在学习上还是生活上，她都给予了我无私的指导和帮助。她学识广博、治学严谨、待入诚挚，这些都给我留下了深刻的印象。她的言传身教使我受益匪浅，这将会在今后的工作和学习中永远激励我前进。感谢张丽慧、周蓓、田菊霞、史丽云、王艳芳、赵冬久、康艳华、钟石根、蔡玲斐等老师以及实验室里的各位同学对我的关怀和指导，正是大家热心的帮助，我才得以顺利完成实验；感谢浙江大学医学院的吴炜、周林福等老师在实验上的协助，正是有了他们的支持，我的实验才能形成完整的体系；感谢动物实验中心的老师，还有孙廷卿学长

4、，正是他们的帮助才让我的实验进展顺利；感谢我的六位同门：于秀石、郎娟、程丽娟、王芳、张晓燕、李敬博，以及学弟学妹们，正是有你们的同甘共苦，才让我体会到了同学间淳朴深厚的友谊；感谢钱江学院同事对我的关心和帮助，正是他们在工作上的鼎力支持，我才能在在职的情况下顺利完成研究生学业。同时还要感谢我的家人和朋友，你们的关心和支持使我冷静面对挫折，克服困难，最终顺利完成学业。．：衷心感谢答辩委员会的各位老师们，你们在百忙之中抽出时间来审阅论文，为我指点迷津!最后再一次向所有关爱我的老师、同学和朋友表示最衷心的感谢!杭州师范大学硕士学位论文共刺激分子

5、CDl37L对HBsAg重组疫苗诱导小鼠免疫应答的佐帮作用共刺激分子CDl37L对HBsAg重组疫苗诱导小鼠免疫应答的佐剂作用中文摘要乙型肝炎病毒(Hepatitis／3virus，HBV)持续感染的主要机理之一是特异性细胞免疫应答不足，而诱导有效细胞免疫的治疗性疫苗有望增强抗病毒免疫，可作为HBV感染综合治疗的有效手段之一。因此，有效性、持续性和安全性兼顾的治疗性疫苗是慢性乙肝免疫治疗研究的一个重要目标。目前市售的含铝佐剂乙肝表面抗原(hepatitisBsurfaceantigen，HBsAg)重组疫苗是有效的预防用疫苗，但由于诱导

6、的细胞免疫应答不足，因雨一般不用于抗病毒治疗。CDl37／CDi37L(4．1BB／4．1BBL)是一对重要的协同刺激信号分子，对增强和维持免疫应答，尤其是特异性T细胞的扩增、存活和记忆性杀伤等均有极其重要的作用，在抗病毒免疫治疗中具有潜在的临床应用价值。本研究构建小鼠CDl37L的真核表达质粒，观察该重组质粒和CDl37L重组蛋白在小鼠体内对HBsAg重组蛋白和含铝佐剂乙肝疫苗诱导特异性免疫应答的免疫调节作用，探讨CDl37L分子作为乙肝重组疫苗的佐剂以增强抗病毒免疫效应的可能性，为慢性乙型肝炎的治疗性疫苗提供新的优化思路。杭州师范2

7、彗硕士学位论文共刺激分子CDl37L对HBsAg重组疫苗诱导小鼠免疫应答的佐剂作用第一部分：小鼠CDl37L真核表达质粒的构建及鉴定目的构建小鼠CDl37L的真核表达质粒，并将该质粒体外转染NIH3T3细胞，检测其CDl37LmRNA和蛋白的表达，为进一步用于动物实验做好前期准备。方法1．重组质粒pcDl37L的构建分离BALB／e小鼠脾细胞，体外经ConA刺激培养后提取细胞总RNA，通过RT-PCR克隆小鼠CDl37L全长eDNA，PCR产物经回收和纯化后克隆到载体pcDNA3．1(+)上。重组质粒分别经PCR、双酶切和测序鉴定。2．

8、重组质粒pcDl37L的表达及检测以脂质体法将重组质粒pcDl37L转染到NIH3T3细胞中，并通过RT-PCR、流式细胞术和免疫荧光法分别检测转染细胞中CDl37LmRNA和蛋白的表达。结果1．重组质粒p