论文实例：重组卡介苗诱导t细胞免疫应答的分子、细胞机理研究

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1、论文实例：重组卡介苗诱导T细胞免疫应答的分子、细胞机理研究作者简介：焦新安，男，1964年09月出生，1997年02月师从于扬州大学刘秀梵教授，于1999年12月获博士学位。摘要牛结核分枝杆菌BCG是世界上广泛使用的疫苗，亦被认为是表达与传递外源抗原的理想活载体之一，然而迄今对BCG或重组BCG(rBCG)与宿主免疫系统相互作用机理尚未阐明，而从免疫调节生物学角度探讨BCG或rBCG诱导T细胞应答的规律亦未涉足。为此，本研究以表达大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(Ma秽lE)的rBCG(rBCG·MalE傻)为模型，以期阐明rBCG与抗原提呈银细胞相互作用的规律、rBCG表达产物偿

2、抗原表位多样性、rBCG和BCG诱导的T细胞应答规律与调控因素。1．重组卡介苗表达的MalE蛋白T细胞矿表位的鉴定在体外抗原提呈试验中，／证实rBCG·MalE成功表达Mal毫E蛋白的四种T细胞抗原表位，即p68せ-82、p100-114、p151-165和p277-291。T细胞增殖坎9/9试验和ELIOT试验结果均表明这种表虬达是功能性的，rBCG·MalE可刺激小鼠产生MalE蛋白及其多肽特异的渚T细胞增殖和IFN-γ应答。表位作图端显示，BCG表达的MalE未形成新的穹抗原表位或使隐蔽表位暴露出来，并进一去步证实MalEp68-82多肽表位是谚MalEH

3、-2d限制性主要T细胞表位椅，而p100-114、p151-16耦5和p277-291多肽表位为次要表咽位。本研究结果表明，作为表达和运送外潼源抗原的BCG载体，它功能性地表达了雀外源抗原MalE蛋白，并能向宿主免疫贡系统有效地传递，这进一步证明BCG是＋一种优良的疫苗载体。2．重组卡介┱苗感染早期树突细胞的作用具有抗原谨提呈细胞(APC)功能的吞噬性细胞，锲通过刺激T细胞应答可促进细菌清除，从俭而在抵抗细菌感染中起重要作用。巨噬细粞胞(M?)是胞内寄生菌的优选宿主细胞肴，并贮存大量的抗原物质，而树突细胞(稂DC)却是非常强势的APC。然而在体煸内针对细菌的T细胞应答中，

4、这两种有吞ǘ噬活性的细胞之作用还未阐明。为此，本研究以rBCG·MalE为材料，对M铴?和DC诱导抵抗细菌的T细胞应答中的媳相对作用进行了探讨。在小鼠接种rBC基G·MalE12小时后，脾脏M?和D厮C的感染率相当，但在来自体内的体外试镙验(Exvivo)中，用针对MalE刈蛋白的特异T细胞杂交瘤仅测出DCS表9/9面存在免疫原性的MalE多肽/MHC粑Ⅱ复合物，而M?却没有。同样，在rB人CG·MalE感染后，仅在DCs观察汇到CD40、(CD80)和(CD86毁)分子表达水平升高，并分泌IL-12腌p40，因而首次证实DC在激发针对分扔枝杆菌T细胞应答中的关键作用

5、。进一步塍试验还显示，脾脏DCCD8α＋和CD晤8α－亚群在体内是相同势能的APC，╆但IL-12的产生主要来自CD8α＋话亚群。这表明在rBCG感染早期，DC隶在体内条件下不仅在针对分枝杆菌获得性免疫中发挥主导作用，而且还通过分泌I格L-12在自然免疫中起重要作用。研究桓中还首次发现，rBCG在其感染早期能げ在DC中存活，但数量没有增长。鉴于DC提呈rBCG抗原能力的迅速丧失，表明除M?外DC亦是rBCG或BCG感伙染早期的贮存宿主细胞。这些结果为BCG感染与免疫机理提供了新认识，对结核痈病控制有重要价值，同时，为以BCG作ヅ载体研制新型疫苗提供了重要理论依据。

6、3．表达MalE重组卡介苗诱导T细磺胞应答的动力学应用免疫磁性分离技俘术去除免疫小鼠脾脏中CD4＋和CD8莱＋T细胞后，在ELIOT试验中证实，优rBCG·MalE诱导的T细胞应答是合CD4＋T细胞依赖的。对MalE、D馏特异T细胞应答的动态分析结果表明，·忧MalE、BCG·wt诱导的特异CD羔4＋T细胞应答存在Th1/Th2平衡酣9/9转换现象，即起始阶段为Th1应答，一あ段时间后出现Th2应答，并逐步形成T礼h1/Th2混合应答。在此基础上，进一步分析了rBCG·MalE诱导针对嗳MalE不同T细胞表位的应答规律，结或果发现，随着感染与免疫过程的发展，针啵对Mal

7、Ep68-82和p277-2策91的特异T细胞应答从起初的Th1应睇答向Th1/Th2混合类型变迁，非常墓有趣的是，针对p100-114的特异ΥT细胞应答呈现典型的Th1/Th2平ㄉ衡转换，而针对p151-165的T细到胞应答仅是Th2类型，而且在免疫后较童长时间才出现。这些结果不仅进一步验证棍rBCG·MalE诱导的T细胞应答规柠律，而且还揭示MalE蛋白不同T细胞蹬表位的功能多样性。此外，研究中证实rBCG不同表达构建产生的MalE及其︱表达量亦直接影响它们诱导免疫应答的质蛱和量。这些结果亦为疫苗的分子设计提供迭了新思路