论文实例：重组卡介苗诱导t细胞免疫应答的分子、细胞机理研究

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1、论文实例：重组卡介苗诱导T细胞免疫应答的分子、细胞机理研究简介：焦新安，男，1964年09月出生，1997年02月师从于扬州大学刘秀梵教授，于1999年12月获博士学位。摘要牛结核分枝杆菌BCG是世界上广泛使用的疫苗，亦被认为是表达与传递外源抗原的理想活载体之一，然而迄今对BCG或重组BCG(rBCG)与宿主免疫系统相互作用机理尚未阐明，而从免疫调节生物学角度探讨BCG或rBCG诱导T细胞应答的规律亦未涉足。为此，本研究以表达大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MalE)的rBCG(rBCG·MalE)为模型

2、，以期阐明rBCG与抗原提呈细胞相互作用的规律、rBCG表达产物抗原表位多样性、rBCG和BCG诱导的T细胞应答规律与调控因素。1．重组卡介苗表达的MalE蛋白T细胞表位的鉴定在体外抗原提呈试验中，证实rBCG·MalE成功表达MalE蛋白的四种T细胞抗原表位，即p68-82、p100-114、p151-165和p277-291。T细胞增殖试验和ELIOT试验结果均表明这种表达是功能性的，rBCG·MalE可刺激小鼠产生MalE蛋白及其多肽特异的T细胞增殖和IFN-γ应答。表位作图显示，BCG表

3、达的MalE未形成新的抗原表位或使隐蔽表位暴露出来，并进一步证实MalEp68-82多肽表位是MalEH-2d限制性主要T细胞表位，而p100-114、p151-165和p277-291多肽表位为次要表位。本研究结果表明，作为表达和运送外源抗原的BCG载体，它功能性地表达了外源抗原MalE蛋白，并能向宿主免疫系统有效地传递，这进一步证明BCG是一种优良的疫苗载体。2．重组卡介苗感染早期树突细胞的作用具有抗原提呈细胞(APC)功能的吞噬性细胞，通过刺激T细胞应答可促进细菌清除，从而在抵抗细菌感染中起

4、重要作用。巨噬细胞(M?)是胞内寄生菌的优选宿主细胞，并贮存大量的抗原物质，而树突细胞(DC)却是非常强势的APC。然而在体内针对细菌的T细胞应答中，这两种有吞噬活性的细胞之作用还未阐明。为此，本研究以rBCG·MalE为材料，对M?和DC诱导抵抗细菌的T细胞应答中的相对作用进行了探讨。在小鼠i.v.接种rBCG·MalE12小时后，脾脏M?和DC的感染率相当，但在来自体内的体外试验(Exvivo)中，用针对MalE蛋白的特异T细胞杂交瘤仅测出DCS表面存在免疫原性的MalE多肽/MHCⅡ复合物，

5、而M?却没有。同样，在rBCG·MalE感染后，仅在DCs观察到CD40、B7.1(CD80)和B7.2(CD86)分子表达水平升高，并分泌IL-12p40，因而首次证实DC在激发针对分枝杆菌T细胞应答中的关键作用。进一步试验还显示，脾脏DCCD8α＋和CD8α－亚群在体内是相同势能的APC，但IL-12的产生主要来自CD8α＋亚群。这表明在rBCG感染早期，DC在体内条件下不仅在针对分枝杆菌获得性免疫中发挥主导作用，而且还通过分泌IL-12在自然免疫中起重要作用。研究中还首次发现，rBCG在其感

6、染早期能在DC中存活，但数量没有增长。鉴于DC提呈rBCG抗原能力的迅速丧失，表明除M?外DC亦是rBCG或BCG感染早期的贮存宿主细胞。这些结果为BCG感染与免疫机理提供了新认识，对结核病控制有重要价值，同时，为以BCG作载体研制新型疫苗提供了重要理论依据。3．表达MalE重组卡介苗诱导T细胞应答的动力学应用免疫磁性分离技术去除免疫小鼠脾脏中CD4＋和CD8＋T细胞后，在ELIOT试验中证实，rBCG·MalE诱导的T细胞应答是CD4＋T细胞依赖的。对MalE、D特异T细胞应答的动态分析结果表明

7、，·MalE、BCG·sofTCellImmune12全文查看ReoesInducedbyRebinantMycobacteriumbovisBCGAtractMycobacteriumbovisBCGisthemostostpromisinglivevectorstodeliverforeignantigetotheimmunesystem.Hoechanismsofinteractionbetmunesystem,andthedetailedcharacteristicsofcell-me

8、diatedimmunityinducedbyrBCGorBCG.Toaddrethesequestio,therBCGexpreingMalEproteinofEscherichiacoli(rBCG·MalE)odelstraintostudythemechanismsbyajorhistopatibilityplexclaⅡ(MHCⅡ)moleculestoTcells,todefihefunctionaldiversityofTcellepitopesofexpreedMa