myostatin基因免疫载体的构建及其对小鼠肌肉增殖的影响

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1、Myostatin基因免疫载体的构建及其对小鼠肌肉增殖的影响TheconstructionofMyostatingeneimmunevectoranditsinfluenceontheabilityofmuscleproliferationinmice作者姓名：李傲楠李傲楠专业名称：动物遗传育种与繁殖指导教师：赵志辉教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年6月3日本研究由吉林省科技支撑重点项目(20110229)和国家“863”计划（2013AA102505）资助Thisresearchwasfunde

2、dbyJilinScientificandTechnologicalDevelopmentProgram(20110229)andTheNationalHighTechnologyResearchandDevelopmentProgramofChina(2013AA102505)中文摘要Myostatin基因免疫载体的构建及其对小鼠肌肉增殖的影响中国是畜牧业大国，可同时中国又是人口大国，这就导致了中国人均占有的畜产品数量还依然很少。然而伴随着人们生活水平的逐渐提高，对畜产品尤其是优质的肉类产品的需求越来越

3、高，这就要求研究者们进一步研究出高产量、高品质的畜产品。肌生成抑制素（Myostatin，MSTN），又称GDF-8，是TGF-β超家族的成员之一，是骨骼肌生长的负调控因子，因其与“双肌性状”关系密切而被广泛关注，该基因的缺失或突变能够引起所编码的蛋白质失活，进而消除其对骨骼肌生长的抑制作用，导致其不能调节肌纤维的降解活动，最终造成肌肉的增生和肥大。由此看来，Myostatin基因与家畜的肉质和胴体性状密切相关。本实验主要研究肌生成抑制素Myostatin基因的融合表达质粒对小鼠肌肉增殖能力的影响。本实验

4、首先利用巢式PCR的方法扩增出肌生成抑制素Myostatin基因的编码区，并将该片段连入到乙肝表面抗原HBsAg基因的3’末端，用以增加其免疫原性。而后将其连接到真核表达载体pEF1α-IRES-DsRed-Express2上，成功得到肌生成抑制素与乙肝表面抗原融合表达质粒pEF1α-DsRed-S-MSTN。将该融合质粒转染到牛胎儿成肌细胞中，利用荧光定量PCR技术以及westernblot技术检测得知，该真核表达载体能够在牛胎儿成肌细胞中高效表达。而后，又以3周龄的昆明小鼠为实验对象，用基因免疫的方法

5、检验该融合质粒对小鼠肌肉增殖能力的影响。实验结果表明，用ELISA检测免疫后小鼠血清内生长激素和甘油三酯水平可知，在9周龄时实验组小鼠生长激素高于对照组，且其后又继续有升高趋势。5周龄时实验组甘油三酯水平显著高于对照组（p<0.05）,且其后一直高于对照组小鼠的甘油三酯水平。而对于小鼠体重来说，前期实验组低于对照组，在5周龄时高于对照组，而后又降低。实验组体重增长率在3周龄到5周龄时达到一个增长高峰，在3周龄到5周龄之间实验组的体重增长率显著高于对照组（p<0.05）。对基因免疫3周后的小鼠进行屠宰，其腿

6、重、腿长、腿宽及股四头肌重均无显著差异（p>0.05）。I综上所述，肌生成抑制素Myostatin基因与乙肝表面抗原融合质粒pEF1α-DsRed-S-MSTN能够成功在牛胎儿成肌细胞和小鼠体内表达。并且在小鼠体内的初步实验研究结果表明其能够对小鼠体内生长激素和甘油三酯水平以及肌肉的增殖具有一定的作用。且对小鼠体重的增长率有积极作用，为后续实验奠定基础，为基因免疫牛实验做出铺垫。以期进一步可以为高肌肉产量肉牛的培育做出一定的贡献，但是更复杂具体的调控作用还需要进一步的实验研究。关键字：Myostatin基

7、因载体构建基因免疫小鼠肌肉增殖IIAbstractTheconstructionofMyostatingeneimmunecarrieranditsinfluenceontheabilityofmuscleappreciationinmiceChinaisabigcountryofanimalhusbandry,butChinaisalsothecountrywithlargepopulationatthesametime.Whatismore,theamountofmeatproductsoccupat

8、ionofperpersonisstillveryfew.Andwiththeincreasingofpeople'slivingstandard,thedemandforanimalproducts,especiallythehighqualityofmeatproductsismoreandmorehigh.Therefore,thisrequiresresearchersfurtherdevelopedhigh-yiel