大鼠体外肝微粒体中cyp1a2和cyp2c9的活性测定及两种中药注射液对其影响的研究

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1、大连医科大学硕士论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特另tl；DH以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：廛垒鱼]签字目期：之旦年』月立日大连医科大学硕士论文关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被

2、查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密瓯作者签名：房纭巧、17tJ胡：力膨年j_月，7171新虢仰新灏吼矽多年删7日闩三罩目冰一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)日【f舌⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘⋯⋯⋯5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．仪器与试药⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62．实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73．溶液配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯74．肝微粒体孵育体系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯85．样品处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯96．色谱条件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯97．非那西丁在大鼠肝微粒体中的酶动力学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯98．双氯芬酸在大鼠肝微粒体中的酶动力学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯109．两种中药注射

4、液对CYPlA2和CYP2C9酶活性的影响⋯10(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111．测定对乙酰氨基酚的方法确证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．测定4．羟基双氯芬酸的方法确证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133．非那西丁在大鼠肝微粒体中的酶动力学⋯⋯⋯⋯⋯⋯164．双氯芬酸在大鼠肝微粒体中的酶动力学⋯⋯⋯⋯⋯⋯175．中药注射液对CYPlA2和CYP2C9酶活性的影响⋯⋯18(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23三

5、、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35大连医科大学硕士学位论文大鼠体91'Bq：微粒体中CYPlA2和CYP2C9的活性测定及两种中药注射液对其影响的研究硕士生姓名：房庆东指导教师：汤新强教授专业名称：药理学摘要目的：建立大鼠体外肝微粒体孵育体系，分别以非那西丁和双氯芬酸作为CYPlA2和CYP2C9的特异性探针药物，通过高效液相色谱法(HighPerformanc

6、eLiquidChromatography,HPLC)分别测定大鼠肝微粒体体系中探针药物非那西丁和双氯芬酸的代谢产物对乙酰氨基酚和4一羟基双氯芬酸的浓度，计算肝微粒体中非那西丁和双氯芬酸的酶动力学参数，进而评价两种酶的活性。同时将不同体积百分浓度的肾康注射液和丹红注射液加入到孵育体系中，通过测定对乙酰氨基酚和4一羟基双氯芬酸的生成量，计算半数抑制浓度IC50来评价两种中药注射液在体外对CYPlA2和CYP2C9酶活性影响。方法：建立体外肝微粒体孵育体系，优化色谱条件，测定对乙酰氨基酚色谱条件为采用HypersilBDSC18柱(150mm×4．6InlTl，50m)

7、，流速为0．8mL·min～，柱温为30。C，检测波长245nlTl。流动相A为乙腈，B为50．0mmol·L叫磷酸氢二钠缓冲液(pH4．5)，梯度洗脱；测定4．羟基双氯芬酸色谱条件为采用HypersilBDSC18柱(250mmx4．6rlll／l，5rtrn)，流速为O．8mL·min～，柱温为30℃，检测波长276nln。流动相A为乙腈，B为50．0mmol·L以磷酸氢二钠缓冲液(pH4．5)，等度洗脱。分别优化肝微粒体体系的孵育时间、蛋白浓度，将探针药物非那西丁和双氯芬酸分别加入体系中，通过HPLC测定代谢产物对乙酰氨基酚和4．羟基双氯芬酸的浓度，以Li