高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体cyp2c9和cyp3a酶活性以及芹菜素对其影响

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1、温州医学院硕士学位论文高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体CYP2C9和CYP3A酶活性以及芹菜素对其影响姓名：叶瑶珍申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：胡国新2012-12-03温灿I医学院硕士学位论文中文摘要目的：建立大鼠微粒体中探针药物检测的高效液相色谱方法，研究大鼠肝微粒体CYP2C9和CYP3A酶的活性以及芹菜素对酶活性的影响。方法：以双氯芬酸钠和咪达唑仑为探针药。CYP2C9的测定采用AgilentZORBAXSB—C18色谱柱分离：流动相为乙腈一水一0．1％三氟乙酸；流速为1mL·min～；柱温40。C；检测波长为278nm：大鼠肝微粒

2、体加入双氯芬酸钠孵育30min后，用盐酸终止反应，加入内标地西泮(100ug·mL。)50uL和乙酸乙酯1mL，涡旋后高速离心，取上层有机相吹干复溶进样；计算Km币IVmax。CYP3A的测定采用AgilentZORBAXSB—C18色谱柱分离；流动相为乙腈一水一O．1％三氟乙酸；流速为lmL·min一；柱温40。C；检测波长为230rim；大鼠肝微粒体加入咪达唑仑孵育5min后，用乙酸乙酯终止反应，加入内标卡马西平(100ug·mL。1)50uL，涡旋后高速离心，取上层有机相吹干复溶进样；计算Km和Vmax。结果：4一羟基双氯芬酸钠在0．05～1

3、0uM范围内线性关系良好(r=O．9998)，测得Km=26．87uM和Vmax=2．359nmol／min／mgpro。卜羟基咪达唑仑浓度在0．01～0．25uM范围内线性关系良好(r=0．9996)，测得Km=9．42uM和Vmax=0．29nmol／min／mgpro。芹菜素对CYP2C9和CYP3A的具有抑制作用，IC50分别为10．37uM，5．502uM。结论：本方法准确可靠、简便快速，适用于大鼠肝微粒体CYP2C9和CYP3A酶活性研究。芹菜素对大鼠微粒体CYP2C9和CYP3A酶具有抑制作用。关键词：HPLC；CYP2C9；CYP3

4、A；肝微粒体；芹菜素DeterminationoftheactivityofCYP2C9andCYP3AinratlivermicrosomesbyHPLCandtheeffectofApigeninABS’I’RAC’11OBJECTIVETodevelopahighperformanceliquidchromatographymethodforthedeterminationoftheprobedruginratlivermicrosomesandstudyoftheactivityofCYP2C9andCYP3AandtheeffectofA

5、pigenin．METHODSDiclofenacwasusedasprobedrugfordeterminationoftheactivityofCYP2C9．TheanalyticalcolumnwaspackedwithAgilentZORBAXSB—C18．Themobilephasewasacetonitrile．water-0．1％trifluoroaceticacidandtheflowratewas1．0mL·min～．TheUVdetectionwavelengthwas2：78nrn．Theincubationwasperfor

6、medwithdiclofenacat37。Cfor30min，thenthereactionwasterminatedbyadding30lxLHCLsolution(1M)．Then50gLDiazepamsolution(10I．tg／mL)and1mLethylacetatewereadded．Aftervortexingfor2min，thesampleswerecentrifugedat13000rpmfor5min，Theorganicphasewastransferredintoacleantubeandevaporatedunde

7、rnitrogenstreamat40oC。功eresidueWasdissolvedin10gLofmobilephase．Thena20¨LaliquotofthesolutionwasinjectedintotheHPLCsystemforanalysis．MidazolamwasusedandasprobedrugfordeterminationoftheactivityofCYP3A．TheanalyticalcolumnwaspackedvdthAgilentZORBAXSB—C18．Themobilephasewasacetonitr

8、ile-water-0．1％triiluoroaceticacidandtheflowratewas1．0mL．min～．