青虾抗利尿肽(NP)和甲壳动物心激肽(CCAP)基因的克隆及表达分析

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1、学校代码：10264研究生学号：M140150309上海海洋大学硕士学位论文青虾抗利尿肽（NP）和甲壳动物心激肽题目：（CCAP）基因的克隆及表达分析CloningandExpressionAnalysisofNPand英文题目：CCAPgeneinMacrobrachiumnipponense研究方向：水产动物遗传育种姓名：单冬艳指导教师：傅洪拓研究员二O一八年五月二十八日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果

2、。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□

3、，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注中国水产科学研究院淡水徐跑研究员主席渔业研究中心中国水产科学研究院淡水殷国俊研究员委员渔业研究中心中国水产科学研究院淡水龚永生研究员委员渔业研究中心夏文水江南大学食品学院教授委员周鹏江南大学食品学院教授委员答辩地点淡水中心南区C-210答辩日期2018.5.30上海海洋大学硕士学位论文青虾抗利尿肽（NP）和甲壳动物心激肽（CCAP）基因的克隆及表达分析

4、摘要青虾，学名日本沼虾（Macrobrachiumnipponense），是我国一类重要的经济虾类，具有较高的经济价值和营养价值。眼柄是青虾重要的内分泌器官，可分泌多种神经肽参与调节青虾的繁殖、抗逆、性腺发育、蜕皮、发育生长、色素分布、渗透压的调节等。青虾存在性成熟时间短的生殖特性，不仅受神经肽等内分泌物质的影响，还受外界环境的影响。因此，本课题组前期构建了雌性青虾繁殖季节和非繁殖季节的眼柄转录组，发现参与调控青虾生理过程的多个重要神经肽，从中筛选到表现出极显著差异的2种，分别是：青虾抗利尿肽（Neuroparsi

5、ns,NP）和甲壳动物心激肽（Crustaceancardioactivepeptide,CCAP），本文对这两种神经肽做了克隆及表达分析。采用快速扩增cDNA末端(rapid-amplificationofcDNAends,RACE)技术获得了NP基因的三个亚型，分别为：Mn-NPI(GenBank登录号，MG783403)，Mn-NPII(GenBank登录号，MG783404)，Mn-NPIII(GenBank登录号，MG783405)，cDNA序列全长分别为2024bp，2271bp，1433bp；ORF编

6、码氨基酸的个数分别为99AA，100AA，101AA。氨基酸序列分析表明三个NP基因序列均含有12个保守的半胱氨酸残基。qPCR结果显示NP基因三个亚型在青虾成体组织中的表达模式不同，Mn-NPI和Mn-NPII在眼柄的表达水平均高于其他组织，但Mn-NPIII在卵巢和肝胰腺的表达水平高于其他组织，说明同一基因的不同亚型的表达具有组织特异性，功能位点有差别。NP基因在青虾卵巢不同成熟期的表达结果显示，Mn-NPI和Mn-NPII在眼柄中的表达水平相似，但Mn-NPIII的表达量较低，推测眼柄是Mn-NPI和Mn-N

7、PII的作用部位。此外，三个亚型的表达变化与卵巢成熟的趋势是相反的，Mn-NPIII在卵巢中表达水平远远高于Mn-NPI和Mn-NPII，推测三个亚型均参与了抑制卵巢成熟，Mn-NPIII对卵巢成熟起主要抑制作用。本文首次检测了NP基因在胚胎发育不同阶段的表达模式，结果显示NP基因在胚胎发育各个阶段均有表达，推测NP基因可能在青虾胚胎发育过程中起重要作用。胚胎从卵裂期(CS)发育至蚤状幼体期(ZS)，Mn-NPI的表达水平持续上升，推测可能由于眼的形I上海海洋大学硕士学位论文成，但Mn-NPIII的表达呈急剧下降趋

8、势，推测Mn-NPIII是母源性基因；此外，在胚胎发育前期，Mn-NPIII的表达水平显著高于Mn-NPI和Mn-NPII，推测Mn-NPIII在胚胎分裂过程中起重要作用，这与上述结果及推断是吻合的。研究结果表明，青虾NP基因与雌性青虾生殖密切相关，可能参与了青虾季节性生殖调控，起到抑制卵巢成熟的作用。本研究结果为青虾生殖机制的研究提供了重要的参考依据，也为