市售虾中副溶血性弧菌耐药性的监测与暴露评估

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1、学校代码：10264研究生学号：M150208396上海海洋大学硕士学位论文题目：市售虾中副溶血性弧菌耐药性的监测与暴露评估MonitoringandExposureassessmentofdrugresistanceof英文题目：VibrioparahaemolyticusinCommercialShrimps专业：食品科学与工程研究方向：食品安全姓名：牛丽指导教师：赵勇教授年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确

2、注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名

3、：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文市售虾中副溶血性弧菌耐药性的监测与暴露评估摘要虾是南亚和东南亚等最为重要的海产品，以其营养丰富、味道鲜美受到人们的喜爱。虾因为含有丰富营养物质成为食源性病原体的载体。副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyticus，VP）是引起肠胃不适、腹泻等疾病的主要病源性细菌。由于抗生素药物不合理、过度使用，使细菌对药物产生抗药，甚至为多重耐药菌株（Multidrugantimicrobialresi

4、stantbacteria，MDRO），因此，监测虾中耐药菌的多样性是控制抗生素使用和保障食品安全的关键。目前研究关于虾中耐药菌多样性检测的应用尚是空白。本课题旨在研究：1）虾中耐药菌多样性的检测，以达到对虾中耐药菌的多样性进行精确监控。2）目前仍缺少对VP耐药性的快速检测方法和暴露评估研究。3）同时针对多重耐药菌株生长异质性进行比较研究，为耐药菌风险评估提供基础数据。1）虾中耐药菌检测多样性检测为研究虾中磺胺嘧啶、盐酸四环素、链霉素耐药菌种类及污染情况，选取上海市3大（曹杨、东方国际、恒大）水产品市场作为研究对象，通过使用PCR-DGGE检测样品中耐药菌的多样

5、性并通过PCR检测耐药基因（Antibioticresistancegenes，ARGs）的多样性。结果显示：弧菌属是磺胺嘧啶、四环素、链霉素耐药菌中的优势菌属（占磺胺总耐药菌44.9%；四环素类总耐药菌的38.2%；占链霉素类总耐药菌41.1%），耐药菌的种群随着抗生素浓度的增加而减少。淡水虾中弧菌属和气单胞菌属为优势菌属，分别占总耐药29.16%和25.32%；弧菌属占海水虾总耐药菌的57.07%。sulI、sulII和strB耐药基因在所有耐药菌中菌检出，大部分耐药菌中检出tetA、tetB、strA耐药基因，耐药基因sulII、tetW、tetM和tet

6、K未检出。通过香农-威纳多样性指数(H')发现，各大水产品市场的虾样品之间的微生物群落存在明显差异（p<0.05），虾从养殖场运到水产品市场的过程中没有交叉污染，说明可能是水产品市场中的二次污染导致微生物的多样性。这是首次检测水产中耐药菌多样性，通过研究PCR-DGGE检对虾中耐药菌多样性，以达到对虾中耐药菌的多样性进行精确监控。2）不同来源VP耐药情况比较研究I上海海洋大学硕士学位论文为了比较不同来源以及不同致病性VP耐药性差异，通过改良K-B纸片法对44株VP进行抗生素耐药性检测，应用PCR技术对其耐药基因（Antibioticresistancegenes

7、，ARGs）进行检测。结果表明：从海水虾和淡水虾分离的副溶血性弧菌菌株的耐药表型无明显差异，其耐药率分别为100%和95.5%；但是致病性菌株多重耐药性（Multidrugantimicrobialresistant，MDR）高达73.7%，显著高于非致病性VP（其为16%）；不同来源以及不同致病性菌株所含耐药基因种类和数量并无显著差异。本研究为VP耐药多样性普查提供基础数据，并对进一步研究抗药菌风险评估提供相关帮助。3）耐药性VP生长异质性比较研究在不同温度(10、20、30、37℃)下,比较17株不同耐药性、耐药表型及基因型不一致的副溶血性弧菌在碱性蛋白胨水

8、(3%NaCl)中最大比