食品中副溶血性弧菌的检验

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1、第一节食品中副溶血性弧菌的检验第八章食品中其它致病菌的检验弧菌电镜照片食品中副溶血性弧菌的检验一、概况副溶血性弧菌（V。parahemolyticus）于1950年从日本一次暴发性食物中毒中分离发现。该菌存在于近海的海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。根据菌体O抗原不同，现已有13个血清群。主要引起食物中毒，尤以日本、东南亚、美国及我国台北地区多见，也是我国大陆沿海地区食物中毒中最常见的一种病原菌。食品中副溶血性弧菌的检验一、概况本菌广泛存在于海水中，偶亦见淡水。在海水中能存活47日以上，淡水中生存1～2日。在37℃、

2、pH7.7、含氯化钠3～4%的环境中生长最好。本菌嗜盐畏酸，在无盐培养基上，不能生长，3%-6%食盐水繁殖迅速，每8～9分钟为1周期，低于0.5%或高于8%盐水中停止生长。对酸敏感，在2%醋酸中或50%的食醋中1分钟即可死亡。不耐热，56℃、5分钟即可杀死，90℃、1分钟灭活。对低温及高浓度氯代钠抵抗力甚强。一、概况目前已发现本菌有12种菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型。从患者粪便分离出菌株属于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，自致病食物分离的菌株90%以上属于Ⅳ、Ⅴ型。致病性菌株能溶解人及家兔红细胞，称为“神奈川”试验（kanagawatest）

3、阳性。其致病力与其溶血能力平行，这是由一种不耐热的溶血素（分子量42000）所致。本菌能否产生肠毒素尚待证明。食品中副溶血性弧菌的检验食品中副溶血性弧菌的检验一、概况媒介食品副溶广泛存在于海岸和海水中，海生动植物常会受到污染而带菌。海鱼、虾、蟹、蛤等海产品带菌率极高；被海水污染的食物、某些地区的淡水产品如鲫鱼、鲤鱼等及被污染其他含盐量较高的食物如咸菜、咸肉、咸蛋亦可带菌，也可因受到污染而引起中毒。带用少量该菌的食物，在适宜的温度下，经3～4小时细菌可急剧增加至中毒数量。进食肉类或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起。

4、媒介食品食品中副溶血性弧菌的检验一、概况临床表现潜伏期多为10小时左右，一般8-40小时，主要症状有恶心、呕吐、上腹部阵发性剧烈腹痛、频繁腹泻、洗肉水样或带粘液便，无里急后重，每日5-6次，体温39℃。重症病人可有脱水、血压下降、意识不清等。病程2-4天，一般预后良好，无后遗症，少数病人因休克、昏迷而死亡.二、生物学特性（一）形态与染色1、革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌，单端鞭毛、两端浓染。杆状、棒状、甚至球状、丝状等（二）培养特性1、需氧或兼性厌氧：生长最好2、在2-３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐>10%不能生长。

5、3、最适温度36℃，PH7.5—7.8（7.7）4、在专用选择性平板上，菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。5、血平板：可见溶血环。（三）生化特性1、分解GLU(血葡萄糖）产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。2、H2S（－）、V-P（－）、靛基质（－）、精氨酸（－）3、甲基红（＋）、赖氨酸（＋）、溶血＋/-V—P试验阴性阳性靛基质试验阴性阳性甲基红试验阳性阴性（四）抗原结构O抗原O1—O1313个群。H抗原：K抗原：K1—K7065个型缺：K2K14K17K35K62三、检验操作要点采样→样品处理→增菌培养

6、→分离培养→3.5%氯化钠三糖铁培养基→嗜盐性试验→生化鉴定→动物试验→结果报告1、采样：患者粪便、呕吐物、可凝食品。从海产品的体表面、肠内容物、鳃等取样必要时包装物，炊具用具。取样后尽快送检，不宜低温保存以免死亡。2、增菌培养：Nacl结晶紫增菌液,37℃8-16小时。3、分离培养：Nacl蔗糖平板：圆形，半透明或不透明，无粘性，(绿)兰色，直径2—4mm嗜盐选择性平板：直径2.5mm，圆整或不齐，隆起混浊，无粘性，无色，湿润。4、选择性培养取上述可疑菌落接种于3.5%Nacl-TSI培养37℃24小时5、镜检：取上述可

7、疑菌落镜检，应为革兰氏阴性，无芽胞多形态，两端浓染。副溶血弧菌在蔗糖琼脂（tcbs）平板上的菌落副溶血性弧菌在海博弧菌显色培养基上典型特征。典型副溶血性弧菌显蓝色至蓝绿色，霍乱弧菌和其它弧菌显无色。6、嗜盐性试验将可疑培养物接种于不同盐浓度的盐胨水中，37℃24小时，观查生长情况。盐含量0、3、7、9、11%，在3-7%生长良好。０　　３　　７　　９117、生化试验分别接种各类生化培养基，置37℃恒温培养。除V-P、靛基质、甲基红试验培养48小时后加试剂观察外，其他均可在24小时观察。试验结果判定参照下表。7、生化试验副溶

8、血性弧菌的生化性状表生化特性生化性状生化特性生化性状葡萄糖产酸＋V-P－葡萄糖产气－靛基质＋蔗糖－赖氨酸＋乳糖－鸟氨酸±甘露醇＋精氨酸－硫化氢－溶血±甲基红＋8、动物试验凡符合副溶血弧菌生化反应的菌株，一般都有毒力，因此都应做动物试验，常用的试验方法有：小白鼠毒力试验：将上述各类反应的副溶血弧菌接种到3