葡萄皮提取物调节grp78表达抑制脂褐素累积rpe细胞凋亡

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1、上海交通大学硕士学位论文葡萄皮提取物调节GRP78表达抑制脂褐素累积RPE细胞凋亡硕士研究生：伍立江学号：1111509043导师：孙向军副教授申请学位：工学硕士学科：食品科学与工程所在单位：农业与生物学院答辩日期：2014年1月授予学位单位：上海交通大学万方数据DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityfortheDegreeofMasterGrapeskinextractsprotectagainstlipofuscin-loadedRPEcellsapoptosisbyregu

2、latingGRP78expressionCandidate：LijiangWuStudentID:1111509043Supervisor：AssociateProf.XiangjunSunAcademicDegreeAppliedfor：MasterofEngineeringSpeciality：FoodscienceandengineeringAffiliation：SchoolofAgricultureandBiologyDateofDefence：Jan,2014Degree-Conferring-Institution：Sha

3、nghaiJiaoTongUniversity万方数据上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文《葡萄皮提取物通过调节GRP78抑制脂褐素诱导RPE细胞损伤》是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日万方数据上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规

4、定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据上海交通大学硕士学位论文葡萄皮提取物调节GRP78表达抑制脂褐素累积RPE细胞凋亡摘要视网膜色素上皮细胞处于光感受器外节和脉络膜内皮细胞之间。最为突出的功能是吞噬和消化老化脱落的外

5、节膜盘，随着年龄的增长RPE细胞内的脂褐素会逐渐积累，这也成为其衰老的标志之一。在可见光或紫外线诱导下积累的脂褐素产生活性氧并引起RPE细胞氧化应激、内质网应激以及未折叠蛋白反应等，导致细胞凋亡，引发年龄相关性眼病。GRP78是内质网中的蛋白分子伴侣，有辅助蛋白质正确折叠的功能，同时参与到细胞凋亡信号转导路径中。本文的研究对象为红葡萄皮提取物。通过化学合成脂褐素主要荧光物质A2E（N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺），建立RPE细胞累积脂褐素模型。检测蓝光诱导A2E累积RPE细胞凋亡，进而研究GSEs对凋亡的抑制作用。在此基础上，研究了GSE

6、s对A2E累积RPE细胞中GRP78及其下游凋亡信号分子CHOP表达的影响。此外，初步探讨了GSEs对A2E累积RPE细胞中活性氧（ROS）的抑制作用。为GSEs作为一种膳食补充剂降低年龄相关性眼病风险提供了实验依据。本课题的主要研究结果如下：（1）通过化学方法合成并纯化获得实验所需A2E，建立RPE细胞脂褐素积累模型。当A2E处理浓度为25μM时，A2E积累量为141±7I万方数据上海交通大学硕士学位论文ng/10^5个细胞与老年人眼组织RPE细胞中含量相近。激光共聚焦显微镜观察发现A2E分散在细胞核周围，与人眼组织中RPE细胞生理状态

7、一致。（2）MTT法检测细胞活力。低浓度A2E对RPE细胞活力没有影响，25μMA2E处理RPE细胞经蓝光照射后培养12h抑制率到达17.87±2.91%。GSEs能抑制蓝光诱导A2E累积RPE细胞活性下降。（3）流式细胞仪检测细胞凋亡。25μMA2E处理RPE细胞后出现凋亡现象，且呈现出时间效应。GSEs能抑制蓝光诱导A2E累积RPE细胞凋亡，浓度为5μg/mL时抑制作用最为显著。（4）机理研究。实验结果表明，GSEs通过上调GRP78表达抑制蓝光诱导A2E累积RPE细胞凋亡。同时，GSEs能抑制GRP78下游凋亡信号分子CHOP表达并

8、减少活性氧的产生。关键词：葡萄皮提取物，视网膜色素上皮细胞，脂褐素，GRP78，氧化应激II万方数据上海交通大学硕士学位论文Grapeskinextractsprotectagainstlip