celecoxib通过抑制survivin表达促进肺癌a549细胞凋亡

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1、Celecoxib通过抑制Survivin表达促进肺癌A549细胞凋亡【摘要】　　［目的］研究Celecoxib对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响并探讨其作用机制。［方法］用TT）比色法检测细胞增殖；流式细胞仪测定细胞周期。［结果］随着Celecoxib剂量的增加和时间的延长，PGE2的含量减少，survivin表达也相应减少，细胞增殖减少而凋亡增加。［结论］Celecoxib可以通过PGE2的途径下调A549细胞survivin的表达并促进细胞凋亡。【关键词】A549细胞　Celecoxib　前列腺素2　环氧合酶2　生存素　　CelecoxibPromoteApoptosis

2、inHumanLungCancerA549CellsbyInhibitingSurvivinAbstract：［Purpose］ToinvestigatetheeffectandmechanismofCelecoxibininducingproliferationinhibitionandapoptosisinhumanlungcancerA549cells.［Methods］TheexpressionofsurvivinthroughCelecoxibblockadingeasuredbyusingMethabenzthiazuron(MTT)assay.Cellcyclea

3、ndapoptosisetry.［Results］EN公司；酶联免疫检测仪购自芬兰LabsystemsDragon公司。1.2方法1.2.1细胞培养及提取蛋白A549细胞接种在含10mlDMEM（含10%小牛血清，青霉素和链霉素各100U/ml，下同）的直径10cm的培养皿中，置于37℃、5%CO2无菌培养箱中培养，2~3d换液，0.25%的胰酶消化传代。为避免血清对实验的影响，待细胞长到70%~80%成熟时换无血清DMEM培养液行Celecoxib干预。干预分为Celecoxib量—效关系组和时—效关系组，每组4皿。Celecoxib量—效关系组每皿分别给予Celecoxib

4、0、10、20、40μmol/L，12h后裂解细胞提取蛋白；Celecoxib时—效关系组每皿分别给予20μmol/L的Celecoxib，分别在0、6、12、24h裂解细胞提取蛋白。每皿在裂解细胞前先留取适量培养上清液，用于做ELISA检测PGE2含量。1.2.2ELISA检测培养上清液中PGE2收集Celecoxib干预各个不同浓度点和时间点的细胞培养上清液，取0.5ml上清液加入1NHCl0.1ml，离心10min，收集上清液再加入1.2NNaOH0.1ml以中和酸性化了的样品。把100μl的标准品或样品分别加入相应孔中，余下操作步骤按PGE2ELISA试剂盒要求进行。在

5、酶联免疫检测分析仪上测定OD492nm值，不加样品的孔作为空白对照孔用于调零，每一个标准品和样品均设置复孔，实验重复3次。1.2.3TT检测细胞凋亡情况为了确定Celecoxib是否通过PGE2途径影响细胞的凋亡，96孔培养板中除设置Celecoxib量—效关系组和时—效关系组外，还相应设置了Celecoxib+PGE2量—效和时—效关系组。每个浓度点和时间点均种4孔并设置对照，计算其OD值均值。每孔接种细胞8000个，加入10%DMEM使总体积为200μl，培养24h细胞贴壁后进行干预。Celecoxib量—效关系组设0、10、20、40μmol/L四个浓度点，分别用A1B1

6、C1D1表示；Celecoxib+PGE2量—效关系组设Celecoxib0、10、20、40μmol/L及PGE2100pg/ml四个浓度点，分别用A2B2C2D2表示；干预12h后每孔加入MTT液20μl(5mg/ml),震荡器震匀，继续培养4h后液体倒出拍干，每孔给予DMSO150μl震匀10min，送酶联免疫检测分析仪中计算其OD490nm值。Celecoxib时—效关系组设6、12、24h3个时间点，用B3C3D3表示，分别每孔分别给予Celecoxib20μmol/L；Celecoxib+PGE2时-效关系组设6、12、24h3个时间点，用B4C4D4表示，每孔分别

7、给予Celecoxib20μmol/L及PGE2100pg/ml；无干预对照时—效关系组用B5C5D5表示；操作方法与量—效关系组相同，分别在干预6、12、24h后处理细胞进行实验。1.2.5流式细胞检测细胞周期及凋亡收集不同浓度Celecoxib（0、20、40μmol/L）处理12h后的A549细胞，0.25%胰酶消化及PBS冲洗液，1000r/min离心10min，-20℃预冷的80%乙醇固定，送北京鼎国生物实验室作细胞周期及细胞凋亡分析，实验重复3次。1.3统计学处理计量资料均以x±