地西他滨联合化疗逆转白血病细胞系多药耐药机制研究

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1、河北医科大学‘学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获发热研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任研究生签名：徘捉葡导师签章：少，弓年≥月习日∥≯：一嚣八∥蠢。j．≯＼＼二簸学院签章奄一rii¨i。■：jj．jjt，i、i。，j。，?i。。．．、√，’．，‘+n，·’⋯”。舻，河北医科大学研

2、究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：确姝面导师签章：加彦年弓月≯]Et目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯】英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文地西他滨联合化疗逆转白血病细胞系多药耐药机制研究—1．￡一——!一日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．”9材料与方法⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。．32结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37综述1YIDR-1基因在白血病中的最新研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，48个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49中文摘要地西他滨联合化疗逆转白血病细胞系多药耐药机制研究摘要目的：白血病是造血系统的恶性肿瘤，是由于细胞内脱氧核糖核酸的变异形成的骨髓中造血组织的不正常工作造成的，目前的治疗手段主要是进行造血干细胞移植和化疗。造血干细胞移植是目前唯一可能治愈白血病的方法，但其受限条件颇多，多数患者无法进行造血干细胞的移植，需进行化疗治疗，但化疗容易出现耐药和复发。多药耐药(MDR)是化疗药物治疗肿瘤的主要障碍之一。人类多药耐药基因的产物膜蛋白P170糖蛋白过度表达，P1

5、70在细胞膜上形成通道借助ATP水解形成的能量，将进入胞内的药物泵出胞外，使细胞内药物浓度降低，产生多药耐药。DNA甲基化所产生的抑癌基因失活是恶性肿瘤发生、发展重要机制之一。现有多项研究表明甲基化修饰可以用药物逆转。地西他滨f5一aza一2deoxycytidine，DCA)是一种DNA甲基化转移酶抑制剂，通过抑制肿瘤细胞甲基化水平而发挥抗肿瘤活性，并且表现有剂量相关机制，高浓度有细胞毒性作用，低浓度时有去甲基化的作用。地西他滨最初被美国FDA批准应用于高危组MDS的治疗，目前国内外已经有研究报道，应用地西他滨和联合化疗治疗难治性髓系白

6、血病，取得较好的临床效果，其中的机制值得进一步研究。本实验以白血病多药耐药细胞系为研究对象，观察地西他滨对多药耐药基因(MDR-1)的影响，比较地西他滨(DCA)联合阿霉素(ADR)或地西他滨序贯阿霉素(ADR)方案治疗对于白血病K562细胞株多药耐药的逆转作用，并探讨其疗效有无差别，以期了解地西他滨在白血病多药耐药机制中的作用，为探索更合理的联合化疗方案治疗白血病打下实验基础。方法：1首先选取K562耐药盐酸阿霉素细胞株(k562／ADR)为研究对象，用CCK8比色法分别检测单药地西他滨或阿霉素对k562／ADR细胞生长的抑制作用，并测

7、出两药48h细胞增殖抑制50％的药物浓度(IC50)。2采用流式细胞检测术法测单药地西他滨或盐酸阿霉素作用后对k562／ADR细胞凋亡的作用；中文摘要3RT-PCR方法检测DAC对K562／ADR细胞MDR-1基因的作用4实验中我们分为(1)空白对照组：不加入任何药物；(2)单ADR组：用91ag／mlADR单独处理细胞48h；(3)单药DCA组：以1lag／ml、5p．g／ml、10}tg／mlDCA分别单独处理细胞48h；(4)实验组a1一a3(DCA+ADR同时联合组)：为ADR+DCA+K562／ADR组，设DCA：1p．g／ml

8、组、5pg／ml、10I．tg／ml组，ADR9pg／m1分别共同处理48小时，(5)实验组bl_b3组(DCA序贯ADR联合组)：为ADIHDCA+K562／ADR，设DCA：11．tg／m