利用脱细胞猪角膜基质膜片构建组织工程化兔角膜基质

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1、万方数据上海交通大学医学院博士学位论文⑧上海交通大学博士学位论文利用脱细胞猪角膜基质膜片构建组织工程化兔角膜基质博士生：马晓昀导师：曹谊林教授专业：外科学上海交通大学附属第九人民医院2013年4月万方数据上海交通大学医学院博士学位论文IIlliIHIIliilIIIllllllmlli[UlUllminii

2、iuimmnY2810455◎Ph·D·DissertationSubmittedtoShanghaiJiaoTongUniversityTISSUEENGD厄ERINGCORNEALSTROMAWITHACCELLU『LARPORCINECORNEALSTROMASHEETI

3、NARABBITMODELAuthor：XiaoyunMaAdvisor：Prof．YilinCaoSpecialty：surgeryAffiliatedFirstPeople’SHospital，ShanghaiJiaoTongUniversityApril，2013万方数据上海交通大学医学院博士学位论文⑧上海交通大学博士学位论文利用脱细胞猪角膜基质膜片构建组织工程化兔角膜基质博士生：马晓昀学号：0107239190导师：曹谊林教授导师组成员：张文杰研究员刘伟教授周广东研究员专业：外科学申请学位级别：博士论文提交日期：2013年4月关键词：脱细胞，角膜基质膜片，组织工程，移植基金

4、项目：国家“973”计划(2005CB522700，2007CB948004，2011CB964)国家“863”计划(2006AA02A126)研究方向：组织工程角膜培养单位：上海交通大学附属第九人民医院万方数据上海交通大学医学院博士学位论文⑧上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：刁劫吗日期：，7pI

5、弓年1月J岬日万方数据上海交通大学医学院博士学位论文◎上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：灭黼指导教师签名：秀汔砧日期：，2。l’年≤月l叶日日期：少(弓年)’月f岬日万方数据上海交通大学医学院博士学位论文⑨利用脱细胞

6、猪角膜基质膜片构建组织工程化兔角膜基质摘要目的探讨氯化钠法及冰冻切片法制备脱细胞猪角膜基质膜片的可行性，并进一步复合兔角膜基质细胞构建组织工程角膜基质，探讨脱细胞角膜基质膜片在兔角膜基质缺损中的修复效果，为角膜基质的组织工程修复治疗提供实验依据。方法将去除上皮层和内皮层的全层猪角膜基质瓣采用氯化钠法脱细胞，组织学检测脱细胞效率，冰冻切片法将脱净细胞的厚基质瓣切成20gm厚度的脱细胞角膜基质膜片，紫外线照射灭菌保存。采用组织块法分离培养兔角膜基质细胞，传至第三代作为构建组织工程角膜基质的种子细胞。将培养的兔角膜基质细胞以三明治法接种于脱细胞角膜基质膜片支架，层层叠加6层膜片形成支架．

7、细胞复合物，体外培养2周后组织学检测组织形成状态。构建兔角膜基质缺损模型，将膜片和基质细胞按照三明治法移植至角膜基质缺损部位，共叠加5层膜片，另设单纯缺损不修复组、厚基质移植组(100gin)、单纯膜片无细胞组(5层)T万方数据上海交通大学医学院博士学位论文⑧为对照组，术后第1月，3月和6月进行大体拍照观察、眼前节光学相干断层扫描、超声角膜测厚、角膜透光度检测、生物力学检测、组织学检查、透射电镜超微结构观察等，评价治疗效果。结果氯化钠法能有效脱除猪角膜基质中的角膜基质细胞，同时能良好地维持基质胶原纤维的形态和排列，在脱细胞基质的基础上制作脱细胞基质膜片简单易行。组织块法培养的兔角膜

8、基质细胞体外生长良好，细胞接种至脱细胞猪角膜基质膜片支架材料上增殖良好，扫描电镜检测显示细胞在膜片上贴附生长良好。体外构建组织分层明显，细胞存活但基质分泌少。兔角膜基质移植修复实验中，单纯缺损不修复组角膜菲薄，局部白色瘢痕及新生血管长入；厚基质移植组透明度尚可，瞳孔区可见云翳，随时间的延长云翳略减淡；单纯膜片无细胞组无明显瘢痕，但可见少量膜片皱褶，角膜欠透明，呈斑翳形态；脱细胞基质膜片接种角膜细胞组3个月时可见缝线周围新生血管生成，6个月时逐渐减退，角膜透明。眼前节光