乳腺癌中sox17、ecrg4 cpg岛异常甲基化调控mrna表达的研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文乳腺癌中SOXl7、ECRG4CpG岛异常甲基化调控mRNA表达的研究Theresearchofaberrantsoxl7,ECRG4CpGislandmethylationregulationmRNAexpressioninbreastcancer课题来源：学位申请人导师姓名陈军叶长生教授专业名称外科学培养类型培养层次专业学位所在学院研究生学院2013年j-月lY日广州硕士学位论文乳腺癌中SOXl7、ECRG4CpG岛异常甲基化调控mRNA表达的研究硕士研究生：陈军指

2、导教师：叶长生摘要背景与目的：乳腺癌(breastcancer，BC)是女性常见的恶性肿瘤，在我国一些发达城市，已是女性发病率第一位的恶性肿瘤，成为危害女性健康的主要疾病。乳腺癌的预后与疾病诊断早晚相关。目前乳腺癌早期诊断依然依靠乳腺彩超、乳腺X线摄影及乳腺磁共振等影像学检查，虽然CAl5．3已作为筛查乳腺癌的重要肿瘤标志物，但其较低的敏感性常导致漏诊和误诊，因此，现仍需寻找一种新的、敏感性高、特异性强的诊断方法。DNA甲基化是一种调节基因表达的重要机制，并发现与肿瘤发生、发展有密切的联系。现研究发现，

3、肿瘤相关基因异常甲基化水平是肿瘤发生过程中一个早期、频发事件，在肿瘤发生、发展中起重要作用。对相关特异基因甲基化模式的研究可以从新的角度解释乳腺癌发展的分子机制。已有研究表明，SOXl7基因异常甲基化是肺癌发生过程中的好发事件，并且是SOXl7基因表达下调的重要机制；在食管癌发生发展中通过启动子甲基化来抑制SOXl7基因表达而激活Wnt信号通路；在食管癌中通过CpG岛的高甲基化来抑制ECRG4基因的表达。还有人用甲基化定性的方法来证实SOXl7基因的CpG岛在乳腺癌组织发生频率高于癌旁组织。本研究利用M

4、assArray技术平台检测36例乳腺癌组织和癌旁组织中基因SOXl7、ECRG4启动子CpG岛甲基化水平；并利用荧光定量PCR检测36例乳腺癌组织和癌旁组织中SOXl7、ECRG4的mRNA表达水平，以探索基因启动中文摘要子CpG岛甲基化水平与mRNA表达水平的相关性。本文还探讨了基因甲基化水平与年龄、雌激素、孕激素状态及淋巴结转移状态的关系，为其异常甲基化水平的临床意义提供了初步理论依据。材料与方法：1．研究对象36例乳腺癌组织及相应癌旁组织(均从南方医院乳腺科科收集，相关临床资料亦由南方医院乳腺科

5、提供)。2．目的基因DNA甲基化水平检测利用全基因组DNA提取试剂盒提取36例乳腺癌组织及癌旁组织基因组DNA，经亚硫酸盐处理后，应用sequenom公司MassArray⑧EpiTYPER技术平台对36例乳腺癌组织、癌旁组织中SOXl7、ECRG4启动子CpG岛甲基化水平进行检测。3．目的基因mRNA表达水平检测我们采用实时荧光定量PCR(Real．timePCR)检测36例乳腺癌组织、癌旁组织中SOXl7、ECRG4的mRNA表达水平。以13-actin作为内参基因较正RNA含量的变异，每份样品均进

6、行3次重复独立实验。采用扩增倍数(2△△Q)表示SOXl7、ECRG4的mRNA相对表达量，扩增倍数=2(c‘对照组目的基因c‘对照组I睢actin)√Q处理组目的基因-Ct处理组IB-actin’。4．目的基因甲基化水平和mRNA表达水平相关性分析采用Spearman检验来分析乳腺癌病例中目的基因启动子CpG岛甲基化水平与mRNA转录水平的相关性，检验采用双侧概率检验，检验水准a=0．05，利用SPSSl3．0软件分析相关数据。5．分析目的基因甲基化水平在各临床指标分组中的差异采用Wilcoxrank

7、sum检验目的基因启动子CpG岛甲基化水平在乳腺癌组织与癌旁组织的差异，以及在雌激素受体阳性／阴性分组、孕激素受体阳性／阴性II硕士学位论文分组中的差异；采用Kruskal．Wallis检验目的基因启动子CpG岛甲基化水平在不同年龄分组、不同淋巴结转移状态分组中的差异。本实验统计检验均采用双侧概率检验，检验水准a=0．05，采用SPSS13．0软件分析相关数据。结果：1．1乳腺癌组织和癌旁组织中SOXl7启动子CpG岛甲基化水平及其mRNA转录水平的研究1．1．1乳腺癌组织与癌旁组织中SOXl7启动子C

8、pG岛的甲基化水平50％(18／36)癌组织的SOXl7启动子CpG岛甲基化水平较癌旁组织明显升高，并且癌组织在每个CG单位的平均甲基化程度比癌旁组织高16％一28％；41．7％(15／36)癌组织的SOXl7启动子CpG岛甲基化程度与癌旁组织无明显区别；8．3％(3／36)癌组织的SOXl7启动子CpG岛甲基化水平低于癌旁组织。1．1．2乳腺癌组织与癌旁组织SOXl7mRNA的转录水平69．4％(25／36)乳腺癌组织的SOXl7mRNA