pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究

pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究

ID:25153230

大小:53.00 KB

页数:6页

时间:2018-11-17

pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究_第1页
pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究_第2页
pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究_第3页
pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究_第4页
pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究_第5页
资源描述:

《pten在胃癌细胞中的表达及其cpg岛甲基化状态的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库

1、PTEN在胃癌细胞中的表达及其CpG岛甲基化状态的研究作者:刘芬,于皆平,邓全军,齐元玲,于红刚【摘要】  目的检测抑癌基因PTEN在四种胃癌细胞中mRNA和蛋白表达水平及其5’启动子区CpG岛甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MethylationspecificPCR,MSP)检测四种不同分化程度的胃癌细胞(HGC27,MGC803,BGC823,SGC7901)中PTEN基因启动子区域甲基化状态,RTPCR和GC803次之(两者间无显著性差异,P>0.05),HGC27表达水平最低(P<0.01),其表达与细胞分化程度呈正相关趋势。结论PTEN基因

2、启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其蛋白表达减少甚至缺失,这可能是导致胃癌发生、发展的原因之一。【关键词】胃癌 PTEN基因 甲基化  StudyingtheExpressionofPTENandItsCpGIslandMethylationStatusinGastricCarcinomaCellsDepartmentofGastroenterology,RenminHospitalofethodsUsingmethylationspecificPCR(MSP)techniquetodetectmethylationstatusofPTENgenein4differentdif

3、ferentiationgastriccancercells(HGC27,MGC803,BGC823,SGC7901),RTPCRandethylation 胃癌的发生涉及癌基因功能增强,抑癌基因突变或功能缺失。作为第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因PTEN(PhosphatesandTensionhomologdeletedonchromosomeTen),在多种肿瘤中存在失活现象,其失活的原因除突变、缺失外,5’CpG岛异常甲基化可能是其失活的第三条途径。本研究采用敏感的甲基化特异性PCR(MSP)方法检测PTEN基因启动子在四种不同分化程度的胃癌细胞中的甲基化状态,并通过RTPC

4、R和GC803,BGC823(低分化),SGC7901(中分化)购自上海生命科学研究院。1.1.2主要试剂Trizol试剂盒,RPMI1640培养基(Gibco公司);胎牛血清(Hyclone公司);亚硫酸氢钠,氢醌,鼠抗人βactin抗体,硝酸纤维素膜(Sigma公司);I1640培养液(pH7.2),在37℃、5%的CO2培养箱中培养。1.2.2RTPCR检测PTENmRNA水平Trizol一步法提取细胞总RNA,经逆转录后再以cDNA为摸板扩增。PTEN基因和βactin的引物序列,见表1。PTENPCR反应条件:94℃3min,以94℃30s,54℃30s,72℃45s循

5、环20次,72℃延伸7min;βactinPCR反应条件:94℃3min,以94℃40s,56℃45s,72℃60s循环20次,72℃延伸7min。1.5%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像系统拍照并检测吸光度值,将PTEN与βactin吸光度比值作为其mRNA水平的相对值。重复实验6次,取均值。1.2.3(终浓度160μM),1×NEBuffer2和1U的Sss1酶共同37℃孵育2h后再经亚硫酸氢钠修饰;完全未甲基化对照仅用亚硫酸氢钠处理;阴性对照分别用没有经亚硫酸氢钠处理的DNA和H2O代替模板DNA进行PCR。1.2.5MSP引物设计根据PTEN基因序列(GenBankaccessionnu

6、mberAF143312),MethPrimer软件,并参照SalvesenHB,KangGH,KangYH等[24]合成,见表1。25μlPCR反应总体系为:10×Taq酶Buffer2.5μl,dNTP2.0μl(终浓度200μM),Taq酶0.5μl(1u),上下游引物各25pmol,MgCL1.0μl,模板DNA2~3μl,补足水至25μl。反应条件为:94℃热启动11min后开始35个循环:94℃40s,63℃45s,72℃1min,最后于72℃延伸12min,4℃保存。产物经8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳溴化乙锭染色后在紫外光下观察,凝胶成像系统拍照。1.3统计学分析所有数据用±s

7、表示,用SPSS11.5软件进行统计学分析,P<0.05为差异有显著性。2结果2.1PTENmRNA和蛋白表达水平见表2。mRNA和蛋白水平SGC7901细胞显著高于HGC27细胞(t=18.1536,P<0.01)及MGC803和BGC823细胞(t=9.010,P<0.01;t=7.4567,P<0.01),后两者显著高于HGC27细胞(t=9.14,P<

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。