抑制dicer的表达对哺乳动物细胞中cpg岛甲基化的影响

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1、万方数据论文题目：拉生』旦i鱼生!的麦鲨过噎垩L麴物细胞虫g卫鱼鱼里基化的影响答辩委员会主席：毯瞳薇教援温划太堂答辩委员会成员：鲁堑盛教援遏州医抖太堂奎塞蝰虽』塾援湿趔医抖太堂随二匡万方数据温州医科大学硕J二学位论文目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Iv中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1Abstract．。。．．．。。。。。．。．．．．。。．。。．．．．．．．．．．．．。．．．．．．．．．。．。。．。。。。。。，。。。．。。。。。，。．．。．。。．。。．。。。．。．。．。．。．。。。．．。。。。

2、。．。9前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．DNA甲基化在哺乳动物中的初步研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32．RNA干扰对DNA甲基化的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33．哺乳动物细胞中，Dicer在基因组的某些局部区域调节DNA甲基化和组蛋白修饰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯61．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一62．实验仪器与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．181．Dicer低表达稳定细胞系的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．Dicer低表达稳定细胞系中目的基因的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．183．Dicer低表达稳定细胞系中CpG岛甲基化水平的改变⋯⋯⋯194．瞬时转染siRNA干扰Dicer的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．205．瞬时转染细胞中目的基因的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．206．瞬时转染细胞中CpG岛甲基化水平的改变⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22万方数据

4、温州医科人学硕i1：学位论文总结与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38万方数据温州医科人学硕’

5、：学位论文缩略词表IV万方数据温州医科人学硕f：学位论文抑制Dicer的表达对Piti孚L动物细胞中CpG岛甲基化的影响中文摘要Dicer

6、是siRNA生物合成过程中的关键酶。研究表明Dlcerr⋯lr,够在很多物种中调节异染色质的形成，影响DNA甲基化和组蛋白修饰，但是，哺乳动物细胞中Dicer是否具有类似的功能，目前尚不十分清楚。目的：本文旨在研究Dicer对哺乳动物细胞巾基因启动了的CpG岛DNA甲基化的调节及相应蛋白编码基因表达的影响，并初步探讨在Dicer低表达的细胞巾，基因启动子的CpG岛DNA基化的水平与基因表达水平的相关性。方法：1．用人结肠癌细胞HCTl16构建Diced氏表达稳定细胞系，通过RT-PCR及westernblot鉴定阳性克隆。2．在HCTll6细胞中

7、瞬时转染DicersiRNA抑制Dicer的表达，用RT-PCR及westemblot检测转染效果。3．在稳转及瞬转细胞中用实时定量RT-PCR检测基因的表达水平。用Bisulfitesequencing技术检测细胞中基因启动子CpG岛的甲基化水平。结果：1．成功构建了Diced氐表达的HCTl16稳定细胞系。2．在抑$1JDicer表达的稳定细胞系中，CPEB2、ICAM．1、LHFP、LIPG、PELl2、SERTAD4、RTNl、SFRP4的mRNA水平增加，LHFP和ICAM．1的CpG岛的DNA甲基化水平降低。3．在瞬时转染Dicers

8、iRNA的HCTll6细胞中，抑$1]Dicer的表达能够诱导CPEB2、PELl2、RTNl基因的表达，降低LHFP和ICAM．1基因启动子CpG岛的DNA甲基化水平。结论：1．抑StJDicer的表达导致一些基因的表达水平上升。2．抑$IJDicer的表达可以在基因组的某些局部区域调节DNA甲基化。3．在抑$1JDicer表达的条件下，基因表达改变并不一定伴有CpG岛DNA基化水平改变。关键词：Dicer；siRNA；CpGu％；DNA甲基化万方数据温州医科人学硕．J：学位论义TheEffectofDicerKnockdownonCpGIsl

9、andMethylationinMammalianCellsAbstractDicerisakeyenzymeinvolvedinsiR