乙肝病毒表面抗原在衣藻叶绿体中高效表达的研究

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1、乙肝病毒表面抗原在衣藻叶绿体中高效表达的研究学位论文完成日期：指导教师签字：j日亏似川J敛亍：答辩委员会成员签字：2013年4月10日墙荔配—77，fk¨，壹岛抖拄太堂班究生堂僮论塞乙肝病毒表面抗原基因在衣藻叶绿体中高效表达的研究摘要衣藻因其所具有的独特细胞结构，清晰的遗传学背景，是研究各种生命现象的模式生物。衣藻叶绿体是良好的生物反应器，是表达外源基因的理想场所。利用转基因衣藻可以表达出具有该附加值的药用蛋白质，但是目前存在外源基因表达量不高的问题限制了衣藻的商业化应用。乙肝病毒是一种严重威胁着人类的健康的病菌。接种乙肝疫苗对预防乙肝病毒感染，控制乙肝病毒传播具有重要意义。我国是乙肝

2、大国，根据我国国情，需要生产足量、显效、廉价的疫苗。．随着基因工程和分子生物学的发展，已经有了在衣藻中表达药用蛋白的先例。本研究是基于以上背景，在实验室原有质粒基础上继续构建含有乙肝病毒表面抗原PreS2S基因的衣藻叶绿体表达载体，并将载体转入衣藻中使其表达乙肝病毒抗原蛋NHBsAg，经过抗性筛选得到阳性藻株，并通过Elisa检测法证实-TPreS2S基因在衣藻叶绿体中获得了表达。本实验结果为以后利用衣藻叶绿体生物反应器生产乙肝疫苗奠定了基础。关键词：莱茵衣藻乙肝疫苗Elisa乙肝病毒表面抗原基因PreS。一SRESEARCHONEFFICIENTEXPRESSIONOFHEPATIT

3、ISBSURFACEANTIGENGENEINTHECHLOROPLASTOFCHLAMYDOMONASREINHARDTIIABSTRACT劬肠聊砌掰onasreinhardtiihasbecomethemodelorganismwhichISusedtostudymanylifephenomenaduetoitsuniquecellstructureandcleargeneticbackgro眦d·国肠朋v豳m彻傩reinhardtiichloroplastwhichisagreatbioreactor1SUSBallYusedtoexpressforeigngenes．Tonow

4、,manyproteinshavebeenexpressedinthechloroPlastofChl口所肋掰D玎∞reinhardtii．Unfortunately，becauseofthelowexpressionleVelofforeigngene，thecommercialapplicationofChlamydomonas删n砌崩聊ha8beenlimited．ThehepatitisBvirusisaseriousthreattohumanhealth．ThehepatitisBVacclnatlonisconsideredaStheonlywayofcontrolling

5、thespreadofhepatitisBV1rusandprev训ngitsinfection．TherearealotofhepatitisBpatientsinChina，andthus1t1snecessarytoproducesufficientquantifies，effectiveandaffordablevaccine·Withdevelopmentofgeneticengineeringandmolecularbiology,someph绷aceuticalproteinshadbeenexpressedinthechloroplastofChla删咖m伽口s陀f，l

6、加砌ff．Inthisstudy,basedontheformerworkofourLab，theexpresSlonVectorsco埘妇ingthePreS2jgeneofHBsAgwereconstructed·ThentheVectorsaboVeweretransfonnedint0thechloroplastofChlamydomonasreinhardtii·Thepositivestralnswereis01atednlrou曲resistancescreeningandthePreSz_SgeneexpresmonleVelwasconfirmedbyELISA．Th

7、isstudyestablishesthefoundationforfurtherbiologicalIIIproductionofhepatitisBvirus．KEYWORDS：ChlamydomonasreinhardtiihepatitisBvaccineElisaHepatitisBvimssurfaceantigengenePreS2—．SIV——一一一壹岛抖技太堂班究生堂焦论室缩写符号AmpdNTPEBEDl’AODPCRcDNA