ⅱ型waardenburg综合征的分子机制研究

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1、中图分类号—R85—6．76UDC610博士学位论文学校代码!Q§3三密级公珏II型Waardenburg综合征的分子机制研究TheInvestigationofMolecularMechanismofWaardenburgSyndromeTypeTwo作者姓名：廖新斌学科专业：临床医学八年制研究方向：耳鼻咽喉科学学院I系、所)：湘雅医院指导老师：冯永教授论文答辩日期j型蚓答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明IJIIlllIIllIIIIUllPlIMIIIlilIY2423869本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写：过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：重勤遗日期：粤年——月——曰学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：删导

3、师签名三兰‰：．二丝每L月一日本课题由以下科研基金资助国家自然科学基金编号：8170923本研究全部工作在中国医学遗传学国家重点实验室完成八年制博士学位论文中文摘要摘要研究背景：Waardenburg综合征(WaardenburgSyndrome，WS)是以听力障碍和色素分布异常为主要表现的遗传综合征，以常染色体显性遗传为主，具有高度的遗传异质性。WS根据临床表型不同，可以分为四型：WSl、WS2、WS3、WS4。其中WS2是最常见的一种类型，目前发现致病基因有MITF、SOXl0和SNAl2，MITF和SOXl0约各占所有WS2病人致病原因的15％，仍有70％的WS2病人未找到致病因素，且

4、基因突变如何导致表型发生的分子机制尚不清楚。目的和方法：为了进一步探讨WS2患者的基因型与表型的内在联系，本研究通过以下方案探讨WS的分子机制：1．收集WS2家系，采集每个患者的详细临床资料，并对相关致病基因MITF、SOXl0、SNAl2的外显子进行突变筛查。2．对发现的MITF基因R255X突变，构建真核表达质粒pCMV．R255X．Flag，瞬时转染黑色素瘤细胞，WesternBlot验证突变蛋白表达量，免疫荧光检测突变蛋白的亚细胞分布情况。3．将MitfRNAi品系果蝇与GAL4品系果蝇杂交，观察子一代果蝇的表型。结果：1．总共收集到3个WS2家系，5个散发病例。并在其中的两个大家系

5、中分别发现MITF基因的c．763C>T(R255X)和c．328C>T(R110X)杂合突变，剩余病例未找到致病原因。R255X已在1个4代中国家系中报道，而R110X则见于2个中国家系，进一步验证发现这两个突变在各自的家系中是共分离的。2．成功构建pCMV．R255X．Flag突变质粒，瞬时转染进UACC903黑色素瘤细胞，发现突变的蛋白表达量明显减少，证实R255X突变的MITF基因编码的是一个截短型蛋白；免疫荧光实验发现，野生型MITF蛋白主要分布在细胞核中，而R255X突变蛋白除了在细胞核中分布外，也有相当大的一部分在细胞质中分布。3．运用GMR—GAL4、Da—GAL4驱动UAS

6、．MitfRNAi表达，其F1代的表型与对照组无明显差异。结论：1．MITF基因的R255X和R110X是中国人群WS2的突变热点，约75％的WS2病例未找到致病原因，提示存在未知的致病基八年制博士学位论文中文摘要因。2．R255X突变蛋白由于丧失了部分HLH、全部Zip及之后的全部区域，出现蛋白表达下降和异常的亚细胞分布，导致WS2的发生。完整的蛋白质和正确的亚细胞分布，对于MITF功能的行使具有重要意义。3．果蝇Mitf的表达具有时空上的特异性，需要更特异性的GAL4才能驱动其表达。～关键词：WS2；MITF；突变；亚细胞定位；果蝇；RNA干扰八年制博士学位论文英文摘要ABSTRACTB

7、ackground：Waardenburgsyndrome(ws)isthemostcommontypeofsyndromichereditryhearingloss，whichismanifestatedofpigmentationanomaliesandhearingloss．Itisalwaysautosomaldominant，withahighdegreeofgeneticheterogeneity