PraderWilli综合征分子分型诊断方法的初步研究

《PraderWilli综合征分子分型诊断方法的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、Prader-Willi综合征分子分型诊断方法的初步研究作者：李洪义，李海飞孟舒，邹小兵，郑辉，陈争，段红蕾【摘要】【目的】探讨Prader-Willi综合征（PWS）的短串联重复序列（STR）连锁分析诊断方法，为遗传咨询提供相关信息。【方法】对一例临床疑似病例经甲基化特异性PCR（MS-PCR）确诊为PWS后，应用15号染色体特定区域的STR进行家系连锁分析，探讨其在PWS分子缺陷类型诊断方面的可行性。【结果】STR连锁分析结果显示该患者为父源缺失型PWS。【结论】STR连锁分析是一种可准确诊断PWS并明确其分子缺陷类型的好方法

2、；国人相关区域的STR位点及其多态信息等有待进一步研究，以完善并最终建立该方法。【关键词】Prader-Willi综合征；短串联重复序列；连锁分析；基因组印迹Abstract:【Objective】ThepurposeofthisresearchwastoapplythemoleculardiagnosticstoChinesePrader-WilliSyndrome(PWS)patient,andfinallyprovidegeneticcounselingtoPWSfamilies.【Methods】Inadditiontom

3、ethylation-special10PCR(MS-PCR),anewmethodoflinkageanalysisbysixshorttandemrepeat(STR)wasusedtodetectthemoleculargeneticdefectofoneChinesePWScase.【Result】ThispatientcouldbediagnosedasPWSbyMethylation-specialPCRandSTRlinkageanalysis.Also,thelinkageanalysisrevealedthatt

4、hepatienthadthepaternaldeletionof15q11-q13.【Conclusion】ThisSTRlinkageanalysiscanidentifythemoleculardefectofPWScasesquicklyandaccurately.WithmoreSTRlocianalyzedandtheirpolymorphisminformationcontentobtained,thislinkageanalysismethodcouldbebetterdevelopedandbecomeapote

5、ntialdiagnosticsinPWScases.Keywords:Prader-Willisyndrome;sshorttandemrepeat;linkageanalysis;genomicimprinting10Prader-Willi综合征（PWS）是一种与基因组印迹相关的遗传性疾病，临床主要特征是新生儿期和婴儿期肌张力减退，吸吮困难；儿童期食欲过盛导致肥胖,身材矮小,促性腺激素分泌不足的性腺机能减退和发育延迟伴中度智力低下[1,2]。国外报道发病率约为每1万至2.2万人中一例[3]。基于DNA的分子诊断是确诊的惟一方

6、法，在早期和症状不典型患者的诊断中具有重要作用。我们采用甲基化特异性PCR确诊了一例PWS患者，应用STR家系连锁分析方法对其进行了分子缺陷类型的研究，为建立PWS分子分型方法的研究奠定了基础。1材料和方法1.1研究对象患者，男，8岁，中山大学附属第三医院儿童行为发育研究中心门诊病人，临床怀疑为PWS患者。该患者足月顺产，新生儿期肌张力低下，哺乳困难需人工喂养；3岁起开始食欲过盛，随年龄增长而明显肥胖，就诊时身高1.25m，体重48kg，额径窄，杏仁眼，上唇薄，手足短小；中度智力低下，语言功能轻度障碍；外生殖器发育不良，双侧隐睾。

7、患者父母表型正常。1.2甲基化特异性PCR（MS-PCR）1.2.1基因组DNA的亚硫酸氢钠预处理取患者外周血常规提取基因组DNA，使用CpGenomeTMDNAModificationKit（Chemicon)甲基化处理，所获得的甲基化处理DNA置-20℃备用［4］。1.2.2聚合酶链反应10人类15q11-13区域内SNRPN基因启动子区含有CpG岛,该区域母源性等位基因处于甲基化状态，而父源性等位基因处于非甲基化状态，根据经亚硫酸氢钠修饰处理后此DNA序列的差异,可设计出针对父源和母源基因的引物。使用Prader-Willi

8、/Angelman甲基化诊断试剂盒(CpGenomeTMPrader-Willi/AngelmanAmplificationKit,Chemicon)进行PCR扩增。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳后，在紫外光下观察DNA条带。1.3短串联重复序列（