马凡综合征的分子诊断与外科治疗研究

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1、分类号学号学校代码密级等肀辦在寧博士学位论文马凡综合征的分子诊断与外科治疗研究学位申请人：马名嘉学科专业：外科学指导教师：潘铁成教授答辩日期年月ADissertationSubmittedtoHuazhongUniversityofScienceandTechnologyfortheDegreeofDoctorofMedicineMoleculardiagnosisandsurgicaltreatmentforMarfansyndromeM.D.CandidateMaMingjiaMajorSurgerySuperviso

2、rPanTieChengHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan430030，独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对木文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，木声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名日期押月今日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校

3、有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。请在以上方框内打“”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：月日日期年亡月华中科技大学博士学位论文目录规第一部分利用二代测序技术检测马凡综合征患者致病基因弓材料与方法寸她第二部分用測序法对二代测序补充及结果验证弓材料和方法结果寸捕第三部分中低温停循环在急性型夹层全弓置

4、换手术当中的应用弓材料和方法寸参考文献华中科技大学博士学位论文全文小结参考文献縮略词索引表在读期间发表的论文华中科技大学博士学位论文中文摘要第一部分利用二代測序技术检測马凡综合征患者致病基因突变目的：马凡综合征是一种常染色体显性遗传病，由于结缔组织病变引起骨骼、眼部和心血管系统受累，易导致主动脉扩张和夹层，致病基因为及。基因发生致病突变也可以出现类似症状。我们希望通过二代测序技术检测马凡综合征患者基因型，验证临床诊断，同时检测二代测序技术对基因和基因覆盖度、准确率。方法：选择两名根据标准确立临床诊断的马凡综合征患者，他们来

5、自不同家系，经同意后采集外周血样本。通过订制功能设计专门适合马凡综合征患者基因检测的多重引物提取患者基因组通过反应用中设计好的引物对目标片段文库进行扩增并加装接头；用油包水仪对文库进行构建；使用系统对模版测序；测序结果利用平台专属软件进行处理并用多种在线软件进行生物信息学分析。结果：通过二代测序仪对来自于两个不同家族的马凡综合征患者基因组的基因和基因进行选择性测序，平均输出读长，每个样本命中率平均为。目标域平均测序深度是层。犮现了个已知或者新的突变。其中第一个患者有个突变，第二个患者有个突变。个突变中，个为终止突变，个为同

6、义突变，个为非同义突变，包括个错义突变，个无义突变以及个移码突变。结论：通过二代测序平台，设计专门，对马凡综合征患者厂、进行基因检测，方法可行并且具有高效，准确的特点。关键词：基因诊断，马凡综合征，二代测序，半导体测序华中科技大学博士学位论文第二部分用測序法对二代測序补充及结果验证目的：应用测序对二代测序得到的和检测结果进行补充测序，同时对于二代测序发现的所有突变，应用测序技术提供验证。通过比较测序与之前测序结果的吻合性来评价二代测序用于检测和这两个多外显子基因的可靠程度。同时利用一代测序对先证者家系成员和健康人群基因组目

7、标片段测序并进行生物信息学分析，判断所发现基因突变的致病性。方法：在征得书面同意后，对所有的先证者和患者家庭成员进行病史釆集。采用统一问卷形式记录患者信息，绘制家系图。对照诊断标准为患者系统症状评分。采集患者及血亲的血样进行基因检测。同时对本院进行健康体检的正常人群例基因组进行比对测序。测序完成后用软件将测序数据转化成可读格式，再利用软件完成序列比对分析。根据我们釆集的临床资料结合测序结果对基因突变导致的生物学效应进行分析解释。结果：对及和基因的补充测序没有发现新的突变位点。通过对马凡综合征患者基因组的重测序，我们确认了之

8、前二代测序的结果。其中无义突变位点编号以及新发现的一个移码突变—，是致病突变，患者家庭成员中被检测该突变的人有相应表型特征，属于马凡综合征患者。新发现的另一个错义突变是良性，在患者及表型正常家属和健康人群中检测到。结论：我们通过测序法验证了二代测序技术对于马凡综合征致病基因和检测的有效性。通过致病基突变