shrna沉默cxcr4基因对卵巢癌细胞egfr信号通路分子机制的研究

《shrna沉默cxcr4基因对卵巢癌细胞egfr信号通路分子机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：学号：2010025掣㈣㈣Y2441007泰山压亏窿硕士学位论文论文题目：shRNA沉默CXCR4基因对卵巢癌细胞EGFR信号通路分子机制的研究作者姓名：王爱霞学科、专业：妇产科学学位类型：学术学位型研究方向：妇科肿瘤指导教师：靳卫国教授入学时间：2010年09月论文工作起止时间：2011年08～2013年01月目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5—1上．——L日Ⅱ青⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2l讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。．．36本研究的创新点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42综j苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59攻读学位期间发表的学术论

4、文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。60原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61shRNA沉默CXCR4基因对卵巢癌细胞EGFR信号通路分子机制的研究研究生：王爱霞专业：妇产科学导师：靳卫国教授中文摘要目的本课题组前期研究已经证明以趋化因子4为靶向的shRNA能够明显抑制卵巢癌SW626细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达，抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。因此，本实验在前期研究基础上更深一步研究抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制。方法扩增含CXCR4-shRN

5、A质粒及空质粒载体，利用阳离子脂质体转染法转染人卵巢癌细胞SW626细胞，本实验分为3组，干扰组(转染CXCR4一shRNA的SW626细胞)、空载体组(转染空载体的SW626细胞)及空白对照组(不给予任何处理的细胞)，转染48小时后，于倒置荧光显微镜下观察转染效率；利用酶标仪结合JC一1法检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化，采用实时定量RT-PCR法检测ASKlmRNA的表达情况。细胞免疫化学和／或WesternBlot检测Caspase一3、EGFR、ERKl／2、P—C—Jun、Akt、TNF—Q、NFr,B

6、p65、Ir．B．Q蛋白的表达水平。结果1．转染48小时后在倒置荧光显微镜下观察转染效率：当细胞处于对数生长期，状态良好，细胞汇合度达90％左右，按脂质体与质粒之比为1：1的比例进行转染，转染效率达到最高，人卵巢癌细胞SW626细胞的转染效率可达80％左右。2．JC一1法检测转染前后干扰组与空白对照组及空载体组相比，线粒体膜电位普遍降低(P<0．001)，差异有统计学意义(尸<0．05)，而空白组与转染空载体组相比∽=0．234)，差异无统计学意义。3．运用RealtimeRT-PCR检测，干扰组与空载体组及空

7、白对照组相比，ASKlmRNA的表达明显增多(P<0．001)，差异有统计学意义。4．采用细胞免疫化学及Westernblot蛋白印迹法，转染48小时后，干扰组与空载1体组及空白对照组比较，CXCR：4-shRNA干扰组细胞中EGFR蛋白及其下游信号分子ERKI／2、Akt、NFrBp65、TNF．a蛋白的表达较空白组及转染空载体组均明显降低，差异有统计学意义(尸<0．05)，干扰组中CaspaSe．3、pC．Jun、Ir．．B．旺蛋白的表达显著提高(P<0．05)，差异有统计学意义。结论CXCR4一shRNA

8、促进细胞凋亡的分子机制可能是通过介导EGFR调控其下游信号因子，进而抑制肿瘤细胞生长。该分子机制的研究为今后卵巢癌的基因治疗提供分子生物学依据。关键词：趋化因子4；RNA干扰：EGFR；卵巢癌S7rUDIESoNT皿MOLECIⅡ。ARM匮CⅡANISMSoFTHEEGFRSIGNAL卫．A1'丑冈刚【yoNSHoRTHAⅡ理矾RNA．INDUCEDCXCR4SⅡJENCD叮GoNov