rnai沉默egfr基因对卵巢癌放疗敏感性的影响

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1、RNAi沉默EGFR基因对卵巢癌放疗敏感性的影响作者：林远洪吴永忠李少林郭启帅罗茜【摘要】目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因对卵巢癌放疗敏感性的增强作用。方法构建针对EGFR基因序列特异性短发夹状RNA(shRNA)表达载体，应用卵巢癌SKOV3细胞建立裸鼠移植瘤模型，随机分为对照组、单纯放疗组、基因放疗组，采用6MVX线照射裸鼠瘤组织，监测瘤体积，测量瘤质量，取瘤组织行RTPCR、Western印迹、免疫组化、电镜检测。结果治疗后三组瘤体积差异均显著(均P<0.01)，单纯放疗组、基因放疗组的抑瘤率分别为2

2、8.1%、46.1%，基因放疗组EGFR基因的表达明显下调，透射电镜下瘤组织凋亡、坏死最明显。结论动物实验证实RNAi沉默EGFR基因明显提高卵巢癌的放疗敏感性。【关键词】EGFR基因;RNA干扰;放疗;卵巢癌　　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)geneontheradiosensitivityofovariancancerbyRNAitechnology.MethodsEGFRgenesequences

3、pecificshRNAexpressionvectorwereconstructed.TumoranimalmodelwithovariancancerSKOV311cellswereestablishedandthenudemicewererandomlydividedintocontrol,radiotherapyandgeneradiotherapygroups.Theovariancancertissuewasirradiatedby6MVXray.Tumorvolumeandtumorweightwere

4、measured.RTPCR,Westernblot,immunohistochemistryandelectronmicroscopywereusedtodetectedcancertissue.ResultsTherewereobviousdifferenceamongthreegroupsintumorvolume(P<0.01).Theinhibitingtumorrateoftheradiotherapyandthegeneradiotherapygroupswere28.1%and46.1%resp

5、ectively.TheexpressionofEGFRgeneingeneradiotherapygroupwassignificantlydecreasedandthetumorcellapoptosis,necrosiswereallobvoius.ConclusionsSilencedEGFRgenebyRNAicansignificantlyimprovetheradiosensitivityofovariancancer.　　【Keywords】EGFRgene;RNAinterference;Radiot

6、herapy;Ovariancancer11　表皮生长因子受体(EGFR)的高表达与肿瘤恶性程度、转移、放化疗敏感度下降密切相关，可作为诊断及判断预后的指标，许多阻滞和下调EGFR的方法被用来抑制肿瘤增殖以改善预后，并已显示出初步疗效及良好的安全性，因此EGFR成为目前公认的肿瘤基因治疗的重要靶位〔1〕。本实验选择放疗相对不敏感的卵巢癌SKOV3细胞为研究对象，以目前分子靶向治疗中的EGFR基因为靶点，采用RNA干扰(RNAi)技术，探讨EGFR基因与卵巢癌放疗敏感性的关系，实验初步显示了RNAi技术在卵巢癌基因放疗中的潜

7、在作用，为肿瘤治疗提供新策略。　　1材料与方法　　1.1主要材料卵巢癌SKOV3细胞株购自中科院上海细胞生物研究所;BALB/C雌性裸鼠购自北京维通利华公司。脂质体lipofectamine2000购自Invitrogene公司;去内毒素质粒提取试剂购自Omega公司;鼠抗EGFR单克隆抗体购自SantaCruz公司;蛋白提取试剂盒购自赛百盛公司;免疫组化试剂盒及SDSPAGE凝胶购自博士德公司;总RNA提取试剂购自华舜公司;RTPCR试剂盒购自宝生公司。　　1.2方法　　1.2.1靶向EGFR基因shRNA表达载体的

8、构建根据siRNA的设计原则及质粒载体pGenesil的多克隆位点特点，选择EGFR家族同源性基因片段(TGGGGTCGTCAAAGACGTT)为模板，利用美国Dharmacon公司siRNA设计软件，获得靶向EGFR基因序列特异性shRNA的质粒载体(pGenesilEGFR)：正义链：5′UGGG