microrna-136在非小细胞肺癌中的作用及其相关机制研究

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniVersityforthedegreeofDoctorUp—regulationofmiR-136inhumannon—small-cenlungcancercellspromotesErk1／2actiVationbyta略etingPPP2I匕ASiningShen31nlng3nenSupeⅣisor：PI．o￡Jia—xiangV比mgSu玛e巧theFirstAfhliatedHospitalSeptember2013原创性声明舢舢删㈣㈣Ⅲ删Ⅲ删洲圳Y25

2、47166本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：、中见百1日期：刀f；年p月／日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅：本人授权郑州大学可以将本学位论文的

3、全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：、棒日期：力侈年p月f日郑州大学2013届博士毕业论文摘要MicroRNA．136在非小细胞肺癌中的作用及其相关机制研究博士研究生：申思宁导师：王家祥郑州大学第一附属医院外科河南郑州450052摘要MicroRNAs(miRNAs)通过抑制靶基因的翻译在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。研究已经发现有多种miRNAs与非小

4、细胞肺癌(non—smal1一cell1ungcancer，NSCLS)的发生有密切关系，但是miR一136在NSCLC中的作用目前还不清楚。我们在本研究中发现，miR—136在NSCLC肿瘤组织中的表达显著上调。通过对多种NSCLC细胞株进行检测发现，与正常细胞株相比，NSCLC细胞株中miR一136的表达均有不同程度的增加。抑制NSCLC细胞株A549中miR一136的表达能够抑制该肿瘤细胞的锚定依赖性和非锚定依赖性增殖。同时，我们还发现miR一136促进NSCLC细胞的增殖与胞外信号调节激酶l／2(eXtracellul册si鲈a1．re则ate

5、dkiIlase1／2，Erkl／2)的活化有关。采用anti-miR—136抑制miR一136的表达后Erkl／2的磷酸化水平显著降低。通过信息生物学方法结合荧光素酶报告基因分析的方法我们发现，丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸酶2A55Kda调节亚基B0【(s甜ne／Ⅱlreonineproteinphosphatase2A55kDaregulatowsubullitBaisofo姗．，PPP2R2A，B55仅)是miR-136的一个直接靶基因，抑制miR-136的表达能够显著上调PPP2R2AmI矾A和PPP2R2A蛋白的表达水平。在NSCLC细胞中过表达P

6、PP2R2A后miR．136引起的EIⅨl／2活化受到抑制，同时IIliR-136引起的细胞增殖也受到抑制。对NSCLC组织进行免疫组化分析的结果也发现，PPP2R2A在NSCLC组织中的表达明显低于正常的癌旁组织。说明，miR．136是通过抑制PPP2R2A的表达促进ERKl／2的磷酸化，总之，本研究发现在NSCLC中，miR．136通过抑制PPP2R2A促进ERKl／2的活化，从而促进细胞的增殖，提示其可能成为临床NSCLC治疗的一个有效靶点。郑州大学2013届博士毕业论文摘要第一部分衄0136在NSCLC肿瘤组织及细胞株中的表达方法1．采用q．P

7、cR的方法对37对NSCLC肿瘤组织，及其相应的癌旁组织中miR．136的表达情况进行分析。并采用q．PcR方法对NSCLC细胞系A549，SPC—A1，NCI．H1299和正常支气管上皮细胞系16HBE中miR．136的表达进行检测2．采用原位杂交的方法检测了miR-136在NSCLC组织中的表达。3．统计学处理：应用SPSSl3．0软件处理数据，数据用均数士标准差(x±s)，两样本均数比较采用独立样本f检验；两个有序变量之间的相关性检验用spe锄a11相关分析，两分类变量的比较用Pearson’s，检验；以a=o．05为检验水准。尸

8、计学意义。结果1．q．PCR和原位杂交的检测结果均显示，与相应的正常组织相比，在NSCLC肿瘤