mir-675-5p在非小细胞肺癌中的作用及其机制研究

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1、万方数据中图分类号壁Z三垒UDC610硕士学位论文学校代码!Q主三3密级公珏miR一675-5p在非小细胞肺癌中的作用及其机制研究ThefunctionandmechanismstudyofmiR-675-5pinnon—smallcelllungcancer作者姓学科专研究方学院(系、指导教论文答辩日期—?_#名：业：向：所1：师：r。“J何丹基础医学病理学与病理生理学湘雅医院段朝军教授答辩委员会主席中南大学二0一四年五月万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致

2、谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：垒笪墨日期：过年三月兰日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论

3、文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：丝日期：丑年且2日导师签日期：月2日万方数据硕士学位论文中文摘要miR-675．5p在非小细胞肺癌中的作用及其机制研究摘要研究背景和目的：肺癌是全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，严重威胁人的身体健康和生命安全。肺癌按组织学分类一般分为鳞癌、腺癌、大细胞癌和小细胞癌，其中前三种临床常见并统称为非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer，NSCLC)，约占全部肺癌的80％。肺癌患者早期一般无明显症状，当确诊时多数已经是肺癌晚期。近年，尽管以外科为主的综合治疗取得了长足的进步，但其5年存活率仍然不足15％。

4、目前唯一能有效提高NSCLC长期生存率的办法就是做到早诊断早治疗，而要做到早诊断，明确NSCLC发生、发展的分子机制有着至关重要的作用。miRNAs是生物体内具有调控功能的一类非编码RNA(长度大约19．24个核苷酸)，其主要通过与靶基因3’端非翻译区(3’UTR)结合，导致翻译抑制或mRNA降解，从而调控靶基因的表达。大量研究表明多种肿瘤组织中存在miRNA异常表达且在肿瘤的发生发展中发挥重要作用，既可作为抑癌基因，下调原癌基因的活性；也可作为癌基因，下调抑癌基因的活性。因此，其作为一类新的分子研究靶点已受到肿瘤等生物医学研究领域极大关注。由于RNA测序(RNA

5、．seq)并i]miRNA芯片杂交方法的广泛应用，许多恶性肿瘤的miRNA表达谱得以建立，其中一些miRNA已成为肿瘤治疗的新靶点和预后的标志物。miRNA在NSCLC中的研究也越来越多，随着研究的不断深入，大量的miRNA在NSCLC中的作用得以明确。最近文献报道miR．675在人类神经胶质瘤、胃癌、肝癌万方数据硕士学位论文中文摘要等多种恶性肿瘤组织中表达上调，且通过调控Cadherin13、RUNXl(RuntDomainTranscriptionFactorl)、Twistl(twistbasichelix．100p．helixtranscriptionfa

6、ctor11等不同的靶基因参与肿瘤发生发展：而另有研究却发现miR-675在肾上腺皮质癌组织中表达下调。提示不同的肿瘤中miR-675的表达及其作用存在不同。miR-675在NSCLC中的表达情况以及是否影响其生物学特性和相关的作用机制至今未见文献报告。本项目拟采用分子生物学、细胞生物学、免疫组织化学等方法分析miR-675．5p在NSCLC癌组织中的表达水平及其临床病理意义；在此基础上，进一步探讨改变miR-675．5p的表达水平分析其对NSCLC细胞恶性生物学特征的影响以及在癌变作用的机制。为确立miR-675．5p作为抗NSCLC治疗的新靶点及预后的分子标志

7、物提供科学依据。方法：1．收集35例临床资料齐全NSCLC病人标本(癌组织与配对癌旁组织)，实时荧光定量PCR检测miR-675—5p在NSCLC癌组织及配对癌旁组织中的表达水平，分析miR．675—5p表达与NSCLC患者临床病理特征的相关性。2．构建LV．miR．675．precursor和LV．miR-675—5p—inhibition慢病毒载体并包装制备病毒(随机任意序列为阴性对照)，感染NSCLC细胞A549和HTB．182，获得miR．675．5p稳定表达上调和下调细胞株，分析上调和下调miR．675．5p的表达对A549和HTB-182细胞生长增殖、

8、侵袭迁移以