il--1β对蛋白激酶活化受体4在初级感觉神经元表达的影响

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1、分类号：学号：2010014f㈣剃泰山匡亏院硕士学位论文论文题目：IL一1B对蛋白激酶活化受体4在初级感觉神经元表达的影响作者姓名：张锐学科、专业：人体解剖与组织胚胎学学位类型：科学学位研究方向：人体解剖指导教师：王昭金教授入学时间：2010年9月论文工作起止时间：2012年3月～2013年4月目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯符号说明4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9刖雷⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·26讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·39附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·40参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43翌贮谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48攻读学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”49原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50IL-lp对蛋白激酶活化受体4在初级感觉神经元表达的影响0IIIIIIUlIIIIIIl研究生：张锐Y2440952专业：人体解剖与组织胚胎学导师：王昭金教授中文摘要目的以培养的大鼠初级感觉神经元及大鼠背根神经节(dorsalrootganglion，DRG)为研究模型，研究白介素一1p(Interleukin一1B，IL．1p)对蛋白激酶活化受体4(protease—activ

4、atedreceptor-4，PAR4)在DRG初级感觉神经元表达的影响。观察PAR4受体及其活化的细胞内机制，从而为进一步阐明PAR4参与外周疼痛信号的调节作用，为外周疼痛的治疗提供实验依据。方法1．初级感觉神经元的分离和培养雄性Wistar大鼠，体重约2009，应用O．4％戊巴比妥钠，2ml，腹腔麻醉后，急性分离大鼠背根神经节(DRG)，取双侧DRG，胰酶消化、均匀吹打，制成细胞悬液，种于六孔培养板，进行初级感觉神经元培养。2．m-zp的孵育本实验分为四组：对照组(IL—lB，0ng／m1)，IL一1p(25ng／m1)组，IL一1p(50ng／m1)组，IL一1D(100n

5、g／m1)组。DRG神经元培养24小时后，加入不同浓度的IL．1p(IL—lp终浓度分别为0ng／ml、25ng／ml、50ng／ml、100ng／m1)，孵育、培养大鼠的DRG感觉神经元，作用4小时。应用Trizol裂解法提取培养的DRG感觉神经元总RNA，用反转录．聚合酶链反应(RT-PCR)核酸扩增技术检测PAR4基因的表达，及IL．1p诱导下对PAR4的基因表达的影响。3．雄性Wistar大鼠，体重约2009，应用0．4％戊巴比妥钠，2ml，腹腔麻醉后，在大鼠的椎旁肌、椎旁皮下及L5／6椎间盘，注射IL．1B(0．5ml，50ng／ma)4小时后，急性分离L4、L5、L6

6、的神经节，4％多聚甲醛液固定，冰冻切片8rtm，利用免疫荧光方法结合荧光显微镜技术，观察PAR4在大鼠DRG感觉神经元的表达。4．PKC激动剂(phorbol12-myfistate13．acetate，PMA325nm)，PKC抑制剂(chelerythfinechloride，5nm)，预先孵育1小时，再应用IL一1D(50n∥m1)作用于DRG感觉神经元，培养4小时，Trizol裂解法提取培养的DRG感觉神经元总RNA，用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)核酸扩增技术检测PAR4基因的表达，及PKC激动剂及抑制剂对IL—lB调控PAR4基因表达的影响。5．分别注射PKC激

7、动剂(0．5ml，20rig／mE)和抑制剂(0．5ml，20ng／mL)，到大鼠的椎旁肌、椎旁皮下及L5／6椎问盘，作用1小时后，再注射IL．1p(O．5ml，50ng／n[d)到椎旁肌、椎旁皮下及L5／6椎间盘，4小时。本实验分为四组：对照组(IL—lB，0ng／ml；PKC激动剂及抑制剂，0ng／m1)，IL一1[3+PKC激动剂组，几一lD组，IL—113+PKC抑制剂组。急性分离L4、L5、L6的神经节，4％多聚甲醛液固定，冰冻切片81．tm，利用免疫荧光方法结合荧光显