猪肠三叶肽tff3基因的克隆与原核表达

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1、分类号河南农业大学兽医硕士学位论密级英文题目：一CloningandProkaryoticExpressionofIntestinal一!!鱼鱼i!P星卫!i鱼曼墨!夏夏3Q曼旦曼Q￡S堕i坠曼学位申请人：型I雅植导师：杨国麽塾援学位类别：兽医亟±领域：基础簦匡堂研究方向：动塑生丝量佥王生塑堂论文提交日期：学位授予日期：致谢本课题试验是在导师杨国庆教授的悉心指导下完成的，无论是在理论学习阶段，还是在论文的选题、设计、研究和撰写环节，导杨老师给予了的悉心指导和帮助。杨国庆教授学识渊博，具有敏锐的洞察力、严谨的治学态度、忘我的工作热情、缜密的思维方式以及探索真理

2、的执着精神，使我在学术研究、生活态度、为人处事等方面都受益匪浅。感谢恩师两年年来在学习上的引导、督促，在科研素质、治学精神上的谆谆教诲，我将永远铭记于心。此外，我由衷的感激实验室的各位老师，在整个研究生学习期问给予的各方面的帮助。本研究的主要工作在河南农业大学牧医工程学院农业部动物生理生化试验室完成，值此论文完成之际，谨向各位老师致以最诚挚的谢意!感谢鲁绍芳和孔江南两位实验管理员一直以来的支持，感谢生理生化实验室的硕士研究生韩慧华、张晓梅、曲晓丽、曹菁菁、刘国章师姐、师兄，感谢同届研究生高会贞、贾艳、杨树、郭准、杨菲等同学；感谢同寝室的好姐妹杜宝宝、张君、白

3、雪丽、暴元元、刘喜阳；感谢你们在两年的学习和生活中给我的帮助和支持。感谢我的家人，正是由于他们无私地关爱、默默地支持、正确地指引我前进的道路，才铸就了我的今天，他们在方方面面给予的帮助和精神上的鼓励，我都将铭刻在心，今后将用我一生的爱来回报我的家人!最后，谨以此文献给所有关心支持我的老师、家人、同学和朋友!河南农业大学2013兽医硕士研究生毕业论文目录目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～错误!未定义书签。摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一11文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．1肠三叶肽TFF3分子结构及基因特点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．2肠三叶肽的分布表达及调节因素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．3TFF3黏膜保护作用与作用机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31．3．1TFF3与粘液糖蛋白的相互作川⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．3．2诱导肠上皮细胞的迁移并促进细胞的增殖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3．3具有细胞保护功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．

5、3．4参与细胞信号的传导⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．4TFF3的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．4．1胃肠道疾病方面⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．4．2在肿瘤研究方面⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．5展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．63材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．73．1试验试剂与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．73．1．1样品采集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73．1．2菌株和质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73．1．3主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73．1．4主要试剂及配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73．2重组表达质粒pET28a-TFF3的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l13．2．1猪肠三叶肽TFF3基因的克隆

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113．2．2质粒pET28a的改造⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．133．2．3重组表达质粒pET28a-TFF3的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯193．3重组表达质粒pET28a-TFF3转化E．coliBL21(DE3)pLysS感受态细胞，IPTG诱导表达，Westernblot鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一203．3．1pET28a-TFF3转化E．coliBL21(DE3)pLysS感受态细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．3．2IPTG诱导表达⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2