根癌家杆菌介导的蓝猪耳遗传转化的研究

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1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2005,13():·研究论文·根癌农杆菌介导的蓝猪耳遗传转化*陈丙春齐一伯唐宇韩玉珍**(中国农业大学生物学院植物生理学与生物化学国家重点实验室，北京10094)摘要：报道了根癌农杆菌(）介导的蓝猪耳()遗传转化的方法。筛选蓝猪耳转化芽的最适卡那霉素(Kan)浓度为400mg/L；以稀释10倍的菌液浸染叶盘10～20min，固体共培养基(含20滋mol/L乙酰丁香酮)上23℃共培养7～8d可获得转化芽诱导率27.2%；16h光照，8h黑暗是较理想的共培养光周期；茎段作为外植体，其转化芽诱导率要高

2、于叶盘的转化芽诱导率，而且其转化芽比叶盘的转化芽健壮；1/2MS+100mg/LKan+0.5mg/LIAA是比较理想的生根培养基。实验结果表明，根癌农杆菌介导的蓝猪耳转化获得了抗性再生植株，转化率为24.1%。关键词：蓝猪耳；转化；根癌农杆菌-mediatedTransformationforCHENBing-ChunQIYi-BoTANGYuHANYu-Zhen**()The-mediatedtransformationofwasinvestigated.Theoptimalconcentrationofkanamycinforscreeningregeneratedbuds

3、was400mg/L.Theidealtransformationwasobtainedinthefollowingconditions:Theleafdiscsweredippedinsuspensionthatdiluted10timesfor10～20min;subsequentlycocultivatedontheMSsolidcoculturemediumcontaining20滋mol/Lacetosyringonfor7to8dat23℃,andtheinductionratioofregeneratedbudswas27.2%;16hlight/8hdarkwas

4、theidealphotoperiod.Thestemsectionswerebetterforinfectionthantheleafdiscs,andthebudsthatregeneratedfromthestemswerestrongerthanthatfromtheleafdiscs.TheidealmediumforrootregenerationwashalfMSsolidmediumcontaining0.5mg/LIAA,and100mg/Lkanamycin.Transformedplantswereobtainedunderaboveconditionsan

5、dtheratiooftransformationwas24.1%.;transformation;蓝猪耳为玄参科蓝猪耳属植物，原产于热带和随着分子生物学的进步，应用植物基因工程技术已亚热带，是一种观赏花卉。在其发育的四核期，胚囊经成为植物发育生物学研究的重要手段。但蓝猪耳从珠孔端伸出，当胚囊完全成熟时，助细胞、卵细胞的遗传转化的研究非常有限，目前只有Aida实验室和大部分中央细胞均暴露于胚珠组织之外，是研究对蓝猪耳遗传转化方法研究的报道(AidaandShi-被子植物胚囊发育和受精的模式植物。应用蓝猪耳bata1995)，他们仅对生芽培养基和转化菌株对转化为材料，已研究了植物双

6、受精的动态过程(Hi-效率的影响作了研究,并没有报道详细的生根实验gashiyama.,1997),花粉管的生长(Higashiyama方法及相关因子对转化的影响。我们对根癌农杆菌.,1998)，花粉管内容物的释放(Higashiyama介导的蓝猪耳遗传转化方法进行了系统探索，获得.,2000)，中央细胞和卵器间的共质体通讯(Han了较为完善的蓝猪耳遗传转化方法并摸索出转基因.,2000)，卵器肌动蛋白的组装(Fu.,2000)等，植株的再生条件,为应用遗传工程手段研究蓝猪耳*基金项目：国家自然科学基金资助项目(No.30070077和No.30270141)资助。陈丙春：女，1

7、979年生，硕士研究生。E-mail:.**通讯作者。Authorforcorrespondence.E-mail:.收稿日期：2004-04-06接受日期：2004-05-09PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn2农业生物技术学报2005年胚囊发育和受精过程分子机制奠定基础。扩增30个循环，循环结束后再延伸10min。1材料和方法2结果和分析1.1植