罗格列酮通过mapk通路抑制抗青光眼术后滤过道瘢痕形成机制研究

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1、中图分类号UDCR77617博士学位论文学校代码密级10533罗格列酮通过MAPK通路抑制抗青光眼术后滤过道瘢痕形成机制研究RosiglitazoneattenuatesscarringafterglaucomafilteringsurgeryviaMAPKpathway作者姓名：骆永恒学科专业：临床医学研究方向：眼科学学院(系、所)：湘雅二医院指导老师：段宣初教授中南大学二0一三年五月原创性声明IUllIIIIllllIlllIIIIIIIlY2422894本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含

2、其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：——年_月一日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：导师签名——日期：——年～月一曰本课题受国家自然科

3、学基金(2011年，81170843)、湖南省科技计划资助项目(2011WK3044)及湖南省发改委2010年科技基本建设项目投资计划(湘省发高技[201011060号)专项基金资助博士学位论文中文摘要罗格列酮通过MAPK通路抑制抗青光眼术后滤过道瘢痕形成机制研究摘要目的研究MAPK通路在TGF．p1诱导的人筋膜囊成纤维细胞(HTFs)活化增殖过程中的作用，探讨罗格列酮对MAPK通路的影响，阐明罗格列酮在兔滤过性手术(GFS)后的抗瘢痕形成作用及其机制，期望为提高GFS手术成功率，控制术后瘢痕形成提供新的方法。方法使用TGF—Bl诱导离体培养的HTFs分化，建立瘢痕化的细胞学模型，通过形态学观

4、察细胞活化，qPCg及Western-Blot等方法检测HTFs的a。SMA，CTGF,ColI的改变。Western．Blot检测ERK，JNK，p38通路在HTFs活化过程中的激活情况及其达峰时间，并检测罗格列酮抑制TGF．Dl后ERK，JNK，p38通路在HTFs的激活。应用ERK，JNK，p38MAPK通路特异性抑制剂分别处理TGF．D1诱导的HTFs。通过形态学观察MAPK通路抑制剂对HTFs的增殖和迁移能力的影响，然后用qPCR、Western-Blot检测MAPK通路抑制剂是否会下调HTFs的0【．SMA，CTGF,ColI的表达。并采用细胞免疫荧光检测MAPK通路抑制剂对o【一

5、SMA表达的影响。比较MAPK通路特异性抑制剂与罗格列酮对HTFs活化的抑制能力。在兔眼行小梁切除手术，建立GFS术后滤过道瘢痕化的动物模型。小梁切除术术毕及术后结膜下注射不同浓度罗格列酮，与术中应用一次0．4mg／ml丝裂霉素C相比较，观察兔眼滤过泡形态和功能及ll博士学位论文中文摘要术后眼压，以及眼前段的毒副作用；术后第7、14、28天每组随机处死3只兔子，应用HE染色，VanGieson染色评价胶原沉积及纤维化水平，最后借助免疫组织化学法观察a．SMA在肌成纤维细胞的含量及分布。结果经TGF-p1诱导后，HTFs出现增殖和分化，qPCR和Western-Blot检测表明a—SMA、CTG

6、F及Col1的转录和蛋白水平均有上调。Western-Blot显示ERK、JNK及p38MAPK信号通路在TGF一131诱导的HTFs活化过程中被激活，罗格列酮的预处理能够抑制ERK、JNK及p38MAPK通路的HTFs的激活。形态学观察发现ERK、JNK及p38MAPK通路的特异性抑制剂均能抑制TGF．131诱导的HTFs活化和迁移，qPCR和Western-Blot检测表明ERK、JNK及p38MAPK通路的特异性抑制剂下调了0【．SMA，CTGF,ColI的转录及蛋白表达。罗格列酮抑制TGF．131诱导的HTFs增殖和活化的能力强于单一的MAPK通路抑制剂。在兔眼行小梁切除手术后能形成滤

7、过泡和降低眼压，但不作特殊处理术后滤过道会因瘢痕形成而失去滤过功能。术中应用丝裂霉素C与术毕及术后结膜下注射罗格列酮均能维持滤过泡的功能及较低的眼压水平，HE染色、VanGieson染色及c【．SMA免疫组织化学检测表明罗格列酮降低了滤过道的胶原沉积。大体观察和组织学研究表明在GFS术后的动物模型结膜下注射罗格列酮未出现明显副作用，且不同浓度罗格列酮组差异无统计学意义。结论结膜下注射罗格列酮能抑制