硼替佐米联合吡柔比星体外诱导t细胞淋巴瘤白血病细胞凋亡的实验研究

《硼替佐米联合吡柔比星体外诱导t细胞淋巴瘤白血病细胞凋亡的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号：R89；R36；R39硕士学位论文硼替佐米联合吡柔比星体外诱导T细胞淋巴瘤/白血病细胞凋亡的实验研究院（系）、所临床医学院研究生姓名刘锦基学科、专业内科学导师姓名韩丽英教授二Ο一三年四月目录1硼替佐米联合吡柔比星体外诱导T细胞淋巴瘤/白血病细胞凋亡的实验研究…………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………81.4材料与方法…………………………………………

2、…………121.5结果……………………………………………………………271.6讨论……………………………………………………………381.7结论……………………………………………………………441.8参考文献………………………………………………………451.9英汉缩略词对照表……………………………………………502致谢……………………………………………………………513蛋白酶体抑制剂硼替佐米在血液疾病治疗中的应用（综述）……………………………………………………………52硼替佐米联合吡柔比星体外诱导T细胞淋巴瘤/白血病细胞凋亡的实

3、验研究摘要目的：T细胞淋巴瘤（TCellLymphoma，TCL）是一种来源于T淋巴细胞的恶性肿瘤性疾病，其临床多表现为侵袭性或高度侵袭性，病程进展快，生存期短，对一般的抗肿瘤药物治疗反应不佳，预后较差，因此需要寻找对其更有效的治疗措施，但至今仍无实质性进展。蛋白酶体抑制剂硼替佐米（Bortezomib）通过影响细胞内调节蛋白的降解，控制NF-кB活性，从而抑制与细胞增殖相关的基因表达，导致肿瘤细胞凋亡。吡柔比星(Pirarubicin)可通过进入细胞内迅速嵌入DNA核酸碱基对间，干扰转录过程，干扰mRNA合成，通过影响DNA

4、聚合酶活性阻止DNA的合成等途径抑制肿瘤细胞生长。体外实验及多中心临床研究均证实硼替佐米（BTZ）、吡柔比星(THP)对多种实体肿瘤具有诱导凋亡的作用，但硼替佐米对T细胞淋巴瘤是否存在诱导凋亡作用及其机制尚未完全清楚，且硼替佐米与吡柔比星是否存在协同作用尚待进一步研究。本研究将探讨硼替佐米在淋巴瘤细胞株Jurkat细胞及原代T细胞白血病细胞中的诱导凋亡作用，同时观察硼替佐米联合吡柔比星的协同作用，为T细胞淋巴瘤/白血病的临床治疗提供实验依据。方法：1、细胞培养及分组:体外培养Jurkat细胞株，以及分离原代T淋巴细胞白血病细胞

5、进行培养，用不同浓度梯度的BTZ、THP单用及联合应用对细胞进行凋亡刺激24h和48h。2、采用细胞计数试剂盒（CellCountingKit-8，CCK-8）比色法检测细胞增殖抑制率，倒置显微镜观察细1胞形态改变，流式细胞技术（flowcytometry，FCM）检测细胞凋亡情况，免疫荧光技术（Immunofluorescence）分析细胞凋亡情况，观察分析两药联合是否存在协同效应。3、统计学分析：应用SPSS17.0统计软件进行统计学分析处理数据，数据均以均数±标准差(¯x±s)表示，各组间采用单因素方差分析，两两比较采用

6、t检验，检验水准α=0.05，P<0.05表示有统计学意义。结果：1、倒置相差显微镜下观察可见，经药物刺激后的细胞形态发生了明显的改变，细胞变暗无光泽，细胞膜不完整，细胞体积缩小，细胞核碎裂等，随药物浓度或作用时间的增加细胞凋亡程度越大。2、细胞计数试剂盒方法检测细胞受抑制程度结果显示：①BTZ、THP单药对Jurkat细胞和原代T白血病细胞增殖具有明显的抑制作用，且抑制率呈时间和浓度依赖性。②当用不同浓度的硼替佐米联合小剂量吡柔比星对Jurkat细胞进行干预24h时，和硼替佐米单药组相比，各浓度的硼替佐米联合吡柔比星对细胞抑

7、制率明显升高，表明BTZ和THP联用存在良好的协同作用；作用于原代T细胞白血病细胞时，BTZ和THP联合应用同样出现显著的协同效应。③但BTZ单用及联合THP对Jurkat细胞和原代T白血病细胞作用效果比较无明显统计学差异。3、流式细胞仪检测药物对细胞的诱导凋亡作用结果显示：①不同浓度的硼替佐米处理Jurkat细胞和原代T细胞白血病细胞24h后与正常对照组相比，随着浓度的增加，凋亡率明显增加。②而当用不同浓度的硼替佐米联合吡柔比星对细胞进行诱导凋亡时，流式结果显示两药联合应用促细胞凋亡效率高于硼替佐米、吡柔比星单药使用组（P<

8、0.01）。③但BTZ诱导Jurkat细胞和原代T白血病细胞的凋亡率比较无明显差异。4、免疫荧光技术结果显示：Jurkat细胞和原代T白血病细胞12经药物作用后，细胞发生凋亡而导致细胞膜不完整，碘化丙啶透过缺损的胞膜而使胞核着色，且随着药物浓度的增大，这种细胞核被染成红色的现