sphk2敲除改善stz诱导的糖尿病及其肾脏并发症的研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________SphK2敲除改善STZ诱导的糖尿病及其肾脏并发症的研究姓名：李柠学号：2111540070院系：药学院学位类型：学术学位专业：药理学研究方向：分子药理学导师：刘冰副教授兰天副教授论文提交日期：2018年3月论文答辩日期：2018年5月学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文SPHK2KNOCKDOWNIMPROVESSTZ-INDUCEDDIABETESA

2、NDITSRENALCOMPLICATIONSCandidate：NingLiStudentID：2111540070Affiliation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：MasterofMedicineSpeciality：PharmacologySupervisor：AssociateProf.BingLiuAssistantSupervisor：AssociateProf.TianLanDayofDefence：May2018Degree-Con

3、ferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文SphK2敲除改善STZ诱导的糖尿病及其肾脏并发症的研究摘要目的：探讨鞘氨醇激酶2（Sphingosinekinase2，SphK2）基因敲除对链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）诱导的糖尿病小鼠降糖作用及其并发症糖尿病肾病的作用。方法：1.SphK2基因敲除对STZ诱导的糖尿病小鼠血糖的影响。将SphK2基因

4、敲除小鼠和野生型小鼠随机分为野生型对照（Wildtypenormaldiet，WT-ND）组、SphK2基因敲除对照（SphK2gene-/-knockoutnormaldiet，SphK2-ND）组、野生型糖尿病（WildtypediabeteinducedbySTZ,WT-STZ）组、SphK2基因敲除糖尿病（SphK2-/-geneknockoutdiabeteinducedbySTZ，SphK2-STZ）组。腹腔注射STZ诱导诱导糖尿病模型，检测每周禁食血糖（Fastingbloodgluco

5、se,FBG），实验第八周检测各组小鼠糖耐量（Oralglucosetolcrancetest,OGTT）情况，以及胰岛素耐量（Insulintolerancetest，ITT）和丙酮酸耐量（Pyruvatetolerancetest，PTT），实验周期结束后，检测各组小鼠血浆胰岛素，胰腺病理形态和胰岛细胞中胰岛素和胰高血糖素，并统计阳性面积；运用原位末端转移酶标记技术（Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTP-biotinnickendlabe

6、lingassay，Tunel）方法，检测各组小鼠胰岛细胞的凋亡情况。2.SphK2基因敲除对STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏的影响。I广东药科大学硕士研究生学位论文采用免疫组化技术，观察STZ诱导的糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）模型小鼠肾脏及自发2型糖尿病db/db小鼠肾脏SphK2的表达情况；采用STZ诱导小鼠成糖尿病肾病，实验周期12周后，检测尿蛋白、血肌酐和尿素氮；取小鼠的肾脏，计算肾脏指数，做H&E染色，PAS染色，天狼猩红染色，观察各组小鼠肾脏的病理形态，纤维化变化；

7、采用免疫组化和q-PCR技术，检测纤连蛋白（Fibronectin，FN）在各组小鼠的变化情况，并且对糖尿病肾病小鼠给予SphK2抑制剂，观察小鼠肾脏病理形态和FN改变情况。结果：1.SphK2基因敲除对STZ诱导的糖尿病小鼠降糖作用。STZ诱导糖尿病小鼠出现了典型“三多一少”糖尿病症状。与WT-STZ组小鼠比较，SphK2基因敲除可明显改善FBG，OGTT，ITT，PTT以及提高血中胰岛素含量。与WT-STZ组小鼠比较，SphK2基因敲除可使胰岛细胞受损和凋亡情况减轻。免疫组化法观察到胰岛细胞分泌胰

8、岛素产生增加，胰高血糖素产生减少。2.SphK2基因敲除对STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏的保护作用。免疫组化结果显示，与正常肾脏比较，SphK2在STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏和自发2型糖尿病db/db小鼠肾脏中的表达均显著增高。-/-正常小鼠组之间24小时尿量比较无明显差异，但SphK2-STZ组小鼠相比WT-STZ组小鼠尿量减少，同时检测24小时尿蛋白，-/-SphK2-STZ组小鼠比WT-STZ组小鼠24小时尿蛋白排泄减少；检II广东药科大学硕士研究生学位