stz诱导的糖尿病鼠视网膜β

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1、STZ诱导的糖尿病鼠视网膜β作者：李养军　惠延年　王雨生【摘要】　　目的:探讨链脲霉素（Streptozotocin,STZ）诱导的糖尿病鼠视网膜β-连环蛋白（β-catenin）表达以及与早期糖尿病视网膜病变发展的可能关系。方法:建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型，用伊文思蓝检测视网膜血管的渗透性；免疫组织化学和O,USA)显色。阴性对照组未加一抗。酒精脱水，二甲苯透明后封片。1.2.4SF和0.005g/Lleupeptin）匀浆，16000g离心20min，取上清，Bradford法测定蛋白浓度(Bio-Rad,Hercules,CA,USA)。等量的蛋白各25μg，用

2、2倍浓度的等体积蛋白上样缓冲液，100℃加热5min，冷却到室温，把蛋白样品直接上样到8%SDS-PAGE胶加样孔内。在上层胶时使用低电压恒压电泳，而在溴酚蓝进入下层胶时使用高电压恒压电泳。溴酚蓝到达胶的底端处附近停止电泳，用三羟甲基氨基甲烷-甘氨酸-甲醇缓冲液将蛋白电转移到硝基纤维膜上1.5h后，用丽春红染色液染色。转膜完成后，在in，吸尽洗涤液后，加入含50g/L的乳脂粉0.5g/LTin。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5～10min。共洗涤3次。滴加1:1000辣根过氧化物酶结合的羊抗兔IgG二抗(VectorLaboratoriesInc.USA)，室温2h。吸

3、尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5～10min。共洗涤3次。用增强的化学发光试剂盒(Amersham,ArlingtonHEights,IL,USA)分析，将所得的阳性条带进行光密度测定，光密度面积计算β-连环蛋白含量。统计学处理：所有实验数据用表示，用Premier5.0统计分析软件，两组均数比较用t检验，P＜0.05认为有显著差别。2结果2.1大鼠体质量和血糖水平的变化STZ诱导的糖尿病大鼠体重显著减轻与对照组相比(P＜0.05)，12mol/L(n=30)，对照组血糖为4.9±0.12mmol/Ln=30)（图1B）。图1STZ诱导的糖尿病大鼠体质量和血糖的变化2.2

4、STZ诱导的鼠视网膜微血管渗透性视网膜血管渗透性测量用伊文思蓝方法。与对照组相比，糖尿病诱导4、8和12.图2糖尿病诱导的视网膜血管渗透性变化图中N、D4、D8和D12分别代表对照组、糖尿病诱导后4、8和12o后视网膜血管消化铺片免疫组织化学染色β-连环蛋白表达显著增加（图4B）。图4胰蛋白酶消化的视网膜微血管β-连环蛋白表达SABC×200A：对照组B：糖尿病组2.5STZ诱导的鼠视网膜β-连环蛋白水平为了进一步证明STZ诱导的糖尿病鼠视网膜在不同阶段β-连环蛋白水平的变化，aJX.KallikrEin-bindingprotEIninhibitsretinalneov

5、ascularizationanddecreasesvascularleakage.Diabetologia,2003;46:689-6986ZhangXL,QiuSD,ChenYJ,SunJ,JohnsonKR.Cadherinsasmodulatorsofcellularphenotype.AnnuRevCellDevBiol,2003;19:207-23511Schergingparadigmsofsignaltransduction.AnnuRevCellDevBiol,1995;11:549-59912LienBOJ,1999;18:3054-306315Ess

6、ersMA,deVriesLM,BarkerN,PoldermanPE,BurgeringBM,Kors.