糖尿病大鼠视网膜缺氧诱导因子

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1、糖尿病大鼠视网膜缺氧诱导因子【关键词】STZ大鼠；,糖尿病视网膜病变；,缺氧诱导因子；,血管内皮细胞生长因子　　Expressionsofhypoxiainduciblefactor1αandvascularendothelialgroalmodelsadeingroupT,andthentheratse(1,3,5months)aftermodeling.TheratsingroupCmunohistochemicalmethodandtheexpressionofHIF1αedintoaverageopticaldensity.

2、RESULTS:86.67%-93.33%ofalltheanimalmodelser.ItsuggeststhattheincreasedexpressionofHIF1αmightbetheinitialfactorforexpressionofVEGFduringdiabeticretinopathy.　　【Keyo;对照组同样随机分为C1，C3，C5三个组，每组5只.分别采用免疫组织化学法检测视网膜VEGF表达、免疫印迹法检测视网膜HIF1α表达，结果以平均吸光度值进行定量比较.结果：糖尿病模型成功率86.67％~93.33

3、%.VEGF检测结果：对照组各组间差别无统计学意义（P＞0.05）；T1与对照组间差别无统计学意义（P＞0.05），但T3，T5与对照组间差别均有统计学意义（t值分别为6.12，8.67，P<0.01），并且T3，T5两组间差别也有统计学意义（t=3.45，P<0.05）.HIF1α检测结果：对照组各组间差别无统计学意义（P＞0.05）；T1，T3，T5分别与对照组相比，其差异均有统计学意义（t值分别为4.35，5.01，5.34，P<0.01），但实验组各组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：STZ糖尿病大

4、鼠视网膜内可观察到VEGF和HIF1α的高表达，后者早于前者，提示在视网膜病变时HIF1α的表达可能是VEGF表达的始动因素.　　【关键词】STZ大鼠；糖尿病视网膜病变；缺氧诱导因子；血管内皮细胞生长因子　　0　引言　　糖尿病目前已成为严重危害公共健康的问题，可引起全身多数器官并发症，而其中微血管并发症之一的视网膜病变（diabeticretinopathy，DR），也日益成为致盲的主要原因.有关DR的病理生理过程已有大量实验研究，并已发现血管内皮生长因子（vascularendothelialgroo；C组同样随机分为C1，C3，

5、C5三个组，每组5只.所有动物均在相同条件下饲养.链脲佐菌素（streptoztocin,STZ)，美国Sigma公司产品；一抗为兔抗鼠VEGFmAb（1∶100），二抗为生物素化羊抗兔IgG，所有抗体和SABC试剂盒，DAB显色剂均购于美国DAKO公司;一抗（1∶200兔抗HIF1α多克隆抗体)，美国Sigma公司.　　1.2方法　　1.2.1糖尿病大鼠模型的建立［2］　　取STZ溶于0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.5)，配置成浓度1.25%的溶液，按60mg/kg对T组大鼠行一次性腹腔内注射，C组大鼠腹腔注射等量柠檬酸缓

6、冲液.药物注射后24～48h检测血糖和尿糖，血糖浓度高于16.5mmol/L，尿糖达～，尿量、饮水明显增多即为模型建立成功；低于上述标准则为造模失败.实验组T1，T3，T5及对照组C1，C3，C5分别在造模成功后1，3，5mo处死，取标本进行下列实验.　　1.2.2免疫组织化学法（SABC）检测　　视网膜VEGF的表达实验动物经10g/L戊巴比妥钠（40mL/kg）腹腔麻醉，用0.1mo/L含有40g/L多聚甲醛的PBS液灌流固定，摘除眼球，石蜡包埋后行16μm连续切片，SABC法行免疫组织化学染色检查，其中对照组一抗以PBS液代替

7、，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行.阳性结果为胞浆内出现棕褐色颗粒.染色结果用LuzexF实时图像分析系统进行分析，计算平均A值.　　1.2.3免疫印迹法（in，取上清液以紫外分光光度计定量，等量蛋白上样进行75g/LSDSPAGE电泳，电泳后湿转至硝酸纤维素膜上.37℃孵育2h，洗膜，加1∶1000的辣根过氧化物酶标记的二抗，37℃孵育1h，洗膜后加入化学发光液反应1min，曝光显影后冲洗胶片.显色结果同样用图像分析系统计算平均A值.　　统计学处理：用SPSS11.0统计软件对各实验数据进行分析处理，结果以x±s表示，采用Fish

8、er确切概率计算法、多组间比较方差分析、组间比较t检验等进行差异显著性分析.　　2　结果　　2.1大鼠糖尿病模型　　实验组腹腔注射STZ后成功复制出糖尿病动物模型：T1组15例，成功14例，失败1例；T3组15例，成功13例，失败2例