糖尿病大鼠视网膜早期病变中pdgf论文

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1、糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF论文刘丽娟，李茂欣，汤旭磊，高林，朱任之【关键词】糖尿病视网膜病变ExpressionofPDGFBinretinaofratsRNAintheretinaofdiabeticratsattheearlystageofdiabeticretinopathy.METHODS:Atotalof60healthyadultmale)大鼠视网膜中的变化规律及其作用.方法：雄性大鼠.分别于造模成功后1.freelo末各组随机取6只大鼠，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）方法检测PDGFBmRNA在大鼠视网膜中

2、的表达水平；电镜观察DM大鼠视网膜超微结构的改变.结果：随着病程的延长，视网膜中PDGFBmRNA表达水平在DM组明显升高，与正常对照组相比于造模后1mo末时即差异具有统计学意义（P＜0.05），3mo末时差异显著（P0.01）；DM大鼠视网膜超微结构的损害随病程进展逐渐加重.结论：PDGFBmRNA在视网膜中的表达水平随DM病程进展逐步升高.【关键词】糖尿病视网膜病变；周细胞；血小板源生长因子B；逆转录聚合酶链反应0引言视网膜周细胞的渐进性功能丧失及死亡为糖尿病(diabetesmelitus,DM)视网膜病变（diabeticretin

3、opathy,DR）的早期典型病理特征.周细胞对于保持微血管形态与功能的完整都有重要作用，缺乏周细胞将导致内皮细胞增生及血管形态异常［1］，并且促使DR进展［2］.血小板源生长因子B（plateletderivedgros公司）；UVIpro凝胶成像与分析系统（华粤公司）.1.2方法雄性大鼠，分笼喂养，以后每2o末DM大鼠组随机取2只大鼠用作电镜观察.摘取眼球、剥离视网膜组织切成15mm×15mm的小块,25g/L戊二醛固定2h,.freelo末各组取大鼠6只，称体质量、测空腹血糖后处死轻摘眼球，剥离视网膜，每2只眼为一组，将分离的视网膜置

4、于去RNA酶的冻存管中，液氮中保存待用.Trizol提取视网膜总RNA，测定纯度及含量，10mL/L甲醛变性凝胶电泳测定其完整性.按Takara一步法RTPCR试剂盒说明操作，反应条件均为逆转录过程50℃30min；94℃预变性3min；扩增94℃30s;50℃30s;72℃1min;30个循环；72℃延伸7min.PCR产物以15g/L琼脂糖电泳.以UVIpro凝胶成像与分析系统检测电泳结果，以PDGFB与βactinPCR产物DNA条带的像素亮度总和之比作为反映PDGFBmRNA水平的相对指标.统计学处理：数据用SPSS10.0进行统计

5、学分析，采用成组设计资料两样本均数比较t检验,结果以x±s表示.P＜0.05表示差异有统计学意义.2结果实验组动物血糖16.7mmol/L26只,食量、饮水量及尿量显著增加，尿糖均在以上；同时体质量增长速度显著减缓，并出现皮毛枯黄、烂尾，行动缓慢、反应迟钝.2.1视网膜超微结构观察正常对照组大鼠视网膜毛细血管内皮细胞、周细胞的核膜完整，染色质分布均匀，细胞器及核形态正常，基底膜连续（Fig1A）.DM1mo组可见周细胞水肿,线粒体肿胀、嵴消失及结构紊乱，但毛细血管内皮细胞及基底膜未见明显改变（Fig1B）.DM2mo组可见周细胞病变进一步加

6、重，毛细血管内皮细胞线粒体肿胀，微绒毛形成（Fig1C）.DM3mo组可见周细胞线粒体肿胀明显，嵴消失，甚至出现空泡性变，核染色质浓缩、边集，其他细胞器减少；内皮细胞水肿、变形,向血管腔内有指状突起,微绒毛增多；毛细血管基底膜增厚，电子密度增大（Fig1D）.2.2PDGFBmRNA的表达量DM组大鼠视网膜中PDGFBmRNA的表达量(Fig2)与同龄正常大鼠相比在1mo病程时即增高，有统计学意义(P0.05);在2mo病程组仍继续增高(P0.05);于3mo病程末时PDGFBmRNA的表达量显著高于同龄正常对照组大鼠(P0.01,Tab1

7、).表1糖尿病大鼠视网膜PDGFBmRNA的相对表达量(略)3讨论PDGFB与同一家族的血管内皮生长因子（vascularendothelialgrouthfactor,VEGF)相似，在视网膜缺氧及血管功能障碍时表达显著增加，二者共同参与了缺氧性视网膜病变.BB的合成便相应增高，通过与特异性受体PDGFRβ结合发挥生物学功能.本实验中PDGFBmRNA表达在1mo时已增高，与Yokota等［4］研究结果一致；并且PDGFBmRNA表达随病程延长而持续升高，因此我们认为DR早期周细胞的破坏、丧失并不是由于PDGFB表达的降低所造成的.Ham

8、mes等［5］发现,与野生型啮齿动物相比，敲除PDGFB单等位基因的啮齿动物的视网膜中周细胞的数量下降30%；而以STZ诱发DM后其视网膜中周细胞减少50%，由此可见，缺少PDG