notch-1、d11-4在糖尿病大鼠早期视网膜病变中的作用

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1、分类号：R774密级：不保密UDC：617学校代码：11065硕士学位论文Notch-1、Dll-4在糖尿病大鼠早期视网膜病变中的作用胡迭指导教师孟旭霞教授学科专业名称眼科学论文答辩日期2015年6月5号摘要目的：观察糖尿病早期大鼠视网膜中Notch-1与Deltalike4(Dll-4)的表达变化，及其与血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）的关系，探讨Notch-1、Dll-4在糖尿病大鼠早期视网膜病变中的作用。方法：健康雄性成年大鼠，随机分为正常对照组、DM1个月（DM1m）组、DM2个月（D

2、M2m）组、DM3个月（DM3m）组、DM3个月+玻璃体腔注射抗Dll4抗体组（DM3m+Anti）组、DM3个月+玻璃体腔注射PBS缓冲溶液组（DM3m+PBS）组。采用免疫组化和RT-PCR方法检测视网膜中Notch-1、Dll-4、VEGFR-2的表达。结果：免疫组化结果显示，Notch-1、Dll-4、VEGFR-2在正常大鼠视网膜节细胞中可见少量表达，糖尿病时在视网膜节细胞、内核层均可见阳性染色，Dll-4、VEGFR-2在内丛状层和外核层也可见阳性表达。DM3m+Anti组中Notch-1、

3、Dll-4表达范围较DM3m组变小，VEGFR-2在视网膜中染色范围更广。DM3m+PBS组与DM3m组无明显区别。荧光定量PCR显示，Notch-1、Dll-4、VEGFR-2在视网膜中mRNA表达量在糖尿病病程不同时期表达不全相同（P=0.00、0.00、0.00），Notch-1、Dll-4在DM3m组视网膜中表达达峰值，DM3m+Anti组视网膜中Notch-1、Dll-4的mRNA表达量较DM3m组明显下降（P=0.01，P=0.04），DM3m+Anti组视网膜VEGFR-2mRNA表达量较

4、DM3m组明显升高（P=0.01），Notch-1、Dll-4、VEGFR-2在DM3m+PBS组与DM3m组之间差异均无统计学意义（P=0.99、0.73、0.59）。采用spearman相关性分析得，VEGFR-2与Dll-4、Notch-1与Dll-4、Notch-1与VEGFR-2的mRNA表达水平呈显著相关（P＜0.05），相关系数分别为0.50、0.65、0.73。结论：大鼠糖尿病早期视网膜病变过程中，Notch-1、Dll-4表达量逐渐增加，且与VEGFR-2呈正相关。玻璃体腔注射抗Dll

5、-4抗体，阻断视网膜中Dll-4、Notch-1的表达后，VEGFR-2的表达量升高。Notch-1、Dll-4在糖尿病早期视网膜病变中发挥一定的调控作用，其作用途径可能与VEGFR-2有关。硕士研究生胡迭（眼科学）指导教师孟旭霞教授关键词：糖尿病视网膜病变；Notch1受体；Delta样配体4；血管内皮生长因子受体2AbstractObjective:ToobservetheeffectoftheNotch-1andDeltalike4(Dll-4)inearlyretinopathyofdiabet

6、icrats,anditsrelationshipwithvascularendothelialgrowthfactorreceptor2(VEGFR-2).Methods:Healthyadultmaleratswererandomlydividedinto6groups:normalcontrolgroup,thediabetesmellitus1month(DM1m)group,thediabetesmellitus2months(DM2m)group,thediabetesmellitus3mo

7、nths(DM3m)group,diabetesmellitus3months+intravitrealinjectionofDll-4antibody(DM3m+Anti)group,diabetesmellitus3months+intravitrealinjectionofPBSbuffersolution(DM3m+PBS)group.DMratswereinducedbyintraperitonealinjectionofStreptozotocin.Usingimmunohistochemi

8、calandRT-PCRmethodtodetecttheexpressionofNotch-1、Dll-4、VEGFR-2inretina.Results:TheimmunohistochemicalresultsshowthattheNotch-1,Dll-4，VEGFR-2expressshortlyinthenormalratretinalganglioncells.Whentheratshavegotdiabetes,Notch-