有机杀虫剂双氢鱼藤酮对人浆细胞的促凋亡作用及其机理研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目有机杀虫剂双氢鱼藤酮对人浆细胞的促凋亡作用及其机理研究研究生姓名张婕妤指导教师姓名毛新良专业名称药理学研究方向肿瘤药理学论文提交日期2013年3月有机杀虫剂双氢鱼藤酮对人浆细胞的促凋亡作用及其机理研究中文摘要中文摘要研究背景和目的：双氢鱼藤酮（DHR）是天然杀虫剂鱼藤酮的代谢产物，与鱼藤酮一样广泛应用于农业生产，包括渔业、园艺和有机农产品等。DHR是一个有效的线粒体抑制剂并可能引起帕金森样综合症，然而DHR对其他系统的作用尚不清楚。因为浆细胞在免疫屏障系统中发挥重要作用，本课题拟研究DHR对人浆细胞的毒副作用，为DHR的安全性评价提供新

2、的证据。研究方法：用噻唑蓝（MTT）法检测DHR是否抑制浆细胞增殖，流式细胞技术检测DHR对浆细胞周期、凋亡和线粒体膜电位的影响。免疫印迹检测DHR对浆细胞的细胞周期蛋白、凋亡蛋白、内质网应激相关蛋白和p38有丝分裂原激活蛋白激酶表达的调控。研究结果：（1）MTT试验表明了DHR能以浓度依耐性的方式抑制人浆细胞存活率，免疫印迹显示DHR下调参与G1期调控点的周期调节剂cyclinD3、CDK4/6、cyclinE和p-Rb的表达以及上调抑癌因子p53的表达，且使浆细胞细胞周期滞止在G0/G1期。（2）流式细胞技术表明DHR能引起浆细胞的凋亡，且免疫印迹证明caspase-3、8、9以及PA

3、RP均被剪切，抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达被下调，促凋亡蛋白Bim表达被上调。（3）利用四甲基罗丹明甲酯（TMRM）染色，经流式细胞技术表明DHR能降低浆细胞的线粒体膜电位。（4）用DHR处理浆细胞不同浓度或不同时间，内质网应激和未折叠蛋白反应的标志蛋白GRP78、ATF4和CHOP均被上调。（5）浆细胞经过不同浓度DHR处理后，有丝分裂原激活蛋白激酶p38磷酸化增加，而JNK磷酸化减少。当用p38抑制剂SB203580预处理浆细胞，由DHR引起的p38磷酸化水平和凋亡蛋白（caspase-3和PARP）的剪切均会被部分下调。研究结论：DHR能抑制人浆细胞增殖并使细胞周期阻滞在G0

4、/G1期，且通过激起内质网应激和激活p38通路引起人浆细胞的凋亡。关键词：双氢鱼藤酮，电子传递链，内质网应激，p38激酶，有机杀虫剂作者：张婕妤指导老师：毛新良I英文摘要有机杀虫剂双氢鱼藤酮对人浆细胞的促凋亡作用及其机理研究ApoptosisinducedbytheorganicpesticidedihydrorotenoneinhumanplasmacellandtheunderlyingmechanismsAbstractBackgroundandpurpose:Dihydrorotenone(DHR)isametaboliteandaninsecticidederivedfromna

5、turalpesticiderotenoneandhasbeenusedinfarmingindustry,suchasorganicproduces.DHRisbelievedtobeapotentmitochondrialinhibitorandprobablyinducesParkinsoniansyndrome,however,itisnotknowntheeffectsofDHRonothersystems.Becauseplasmacellsareimportantintheimmunebarriersystem,weevaluatedthecytotoxicityofDHRo

6、nhumanplasmacells.ThisstudyprovidedanewinsightinthesafetyevaluationofDHRapplication.Methods:MTTassayswereusedtodetectwhetherDHRinhibitsproliferationofplasmacells,flowcytometrywasusedtodetecttheeffectofDHRoncellcycle,mitochondrialmembranepotentialandapoptosis.Theregulationofcellcycleregulators,apop

7、toticproteins,ERstressrelatedproteinsandp38MAPKweremeasuredbyimmunoblotting.Results:(1)MTTassaysshowedDHRinhibitedproliferationofplasmacellsinaconcentration-dependentmanner.FlowcytometryshowedDHRarrestedplasmacel