米非司酮联合紫杉醇对人宫颈癌细胞的作用及其机理的研究

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1、分类号R71密级公开UDC硕士学位论文米非司酮联合紫杉醇对人宫颈癌细胞的作用及其机理的研究学位申请人：朱丽学科专业：妇产科学指导教师：叶红教授二○一二年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineEeffetofchemotherapywithpaclitaxelandmifepristoneagainsthumancervicalcellandinhibitionofcervicalcellgrowthanditsmolecu

2、larmechanismsGraduateStudent:ZhuLiMajor:GynaecologyandobstetricsSupervisor:Prof.YeHongChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2012三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完

3、全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：Ⅰ三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：

4、研究米非司酮（Mifepristone，MIF）、紫杉醇（TAX）及两者合用在体外对人宫颈腺癌Hela细胞和人宫颈鳞癌SiHa细胞增殖影响，并探讨其作用机制，以期发现一种通过诱导细胞凋亡来抑制宫颈癌细胞生长的新的联合用药，为扩大米非司酮化疗增敏的用药奠定科学的理论基础。方法：取对数生长期的人宫颈癌Hela细胞、SiHa细胞，以单药及联合用药处理后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性；流式细胞仪（flowcytometry,FCM）分析药物对人宫颈癌Hela细胞、SiHa细胞的周期影响；RT-PCR法检测用药处理后对人宫颈癌Hela细胞、SiHa细胞

5、中HPVE6、VEGF、COX-2mRNA表达的变化；免疫印迹（Westernblot）方法检测用药处理前后人宫颈癌Hela细胞、SiHa细胞的HPVE6、VEGF、COX-2蛋白表达的变化。结果：1）MTT法结果显示，发现不同浓度紫杉醇对HeLa细胞、SiHa细胞增殖均有抑制作用（P<0.01），具有量效和时效依赖性；MIF单药结果显示24h，48h对HeLa细胞溶媒组、MIF组(2.5、5μg/mL)与空白对照组比较,对HeLa细胞增殖抑制率影响无统计学意义(P>0.05)，当MIF浓度大于10μg/mL时对HeLa细胞增殖抑制率影响有统计学意义(P<0.05

6、)，具有量效和时效依赖性；不同浓度MIF对SiHa细胞具有明显的增殖抑制作用(P<0.05)；MIF联合紫杉醇可增强其对HeLa细胞、SiHa细胞的增殖抑制作用(P<0.01)；2）流式细胞术结果显示，单用及联合用药使HeLa细胞、SiHa细胞G0/G1期所占比例增加，S期比例减少，使周期主要阻滞在G0/G1期，从而显著抑制HeLa细胞、SiHa细胞的增殖；3）RT-PCR结果显示，单用及联合用药处理HeLa细胞、SiHa细胞后使HPV-E6、VEGF、COX-2mRNA的表达水平下降；4）Westernblot检测显示，单用及联合应用均能使HPV-E6、VEGF

7、、COX-2蛋白表达下调，呈浓度依赖性，且以联合应用更为显著。结论：1）首次应用米非司酮联合紫杉醇作用于不同宫颈癌细胞，求证了米非司酮的化疗增敏作用。2）米非司酮可以抑制宫颈癌HeLa细胞、SiHa细胞的体外增殖作用以及阻滞细胞周期，并呈一定时间和浓度的依赖性。3）米非司酮对HeLa细胞、SiHa细胞增殖抑制和化疗增敏作用与下调HPV16-E6、VEGF、COX-2蛋白表达有关。关键词：宫颈癌米非司酮化疗增敏Ⅱ三峡大学硕士学位论文AbstractObjectiveToinvestigatetheeffectandmechanismsofchemotherapydr

8、ugMif