米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外作用的研究[1].pdf

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1、中国综合临床2006年9月第22卷第9期
ClinicalMedicineofChina,September2006,Vo.l22,No.9
853

论著
米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外作用的研究王惠兰
张贺玲
黄向华
袁芳
杨素娟

摘要
目的
观察米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响。方法
选用生长良好的人宫颈癌Hela细胞株进行体外培养,不同浓度的米非司酮作用72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定米非司酮对细胞生长的抑制作用;应用光学显微镜、透射电子显微镜观察药物作用后细胞的形

2、态学改变,终末脱氧核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,计数凋亡细胞,计算凋亡率。结果
米非司酮浓度分别为5、10、20、40
mol/L时作用72h,细胞生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为36.74%、49.62%、61.96%、71.34%,明显高于对照组(P<0.01);同时出现明显的凋亡现象,光学显微镜、透射电子显微镜下均可观察到细胞凋亡的形态学改变,TUNEL法证实了凋亡率分别为28.67%、39.00%、54.33%、64.33%,明显高于对照组(P<0.01),各浓度

3、间凋亡率比较差异亦有显著性(P<0.01)。结论
米非司酮显著抑制人宫颈癌Hela细胞的生长,并具有诱导细胞凋亡的作用,随着药物浓度的增加,效应明显增强。


关键词

宫颈肿瘤;
米非司酮;
肿瘤细胞;
凋亡


中图分类号
R737.33
文献标识码
B

文章编号
1008-6315(2006)09-0853-03

女性生殖系统肿瘤均有不同程度的雌、孕激素1.2.2
MTT比色法测定细胞生长抑制情况
调整4受体表达,许多学者发现,雌、孕激素与其受体相互细胞密度至3
10个细胞/m,l充分混匀,

4、接种到96作用在妇科恶性肿瘤的发生和发展中起重要作孔培养板中,每孔200
,l置于培养箱内培养,至对数[1]用。目前,妇科恶性肿瘤的激素治疗尚存在较多生长期,吸去上清液;实验组分别加入200
l新鲜配争议。米非司酮(RU486)系人工合成的类固醇激制的含不同浓度的含药培养液,终浓度分别为5、10、素,为强效受体水平的孕激素受体、糖皮质激素受体20、40
mol/L(药物浓度根据临床用药血药浓度和拮抗剂,主要用于终止早期妊娠。该药作为终止早预实验确定),对照组加入200
l含等量无水乙醇的孕的有效药物,在临床上已

5、经广为使用。近年来,随培养液,继续培养。每天于显微镜下观察细胞生长着研究的不断深入,发现作为有效的孕激素受体拮情况,72h后取出培养板,每孔加入20
l(浓度为5抗剂米非司酮还具有抗肿瘤作用。目前,已有用于g/L)MTT,轻振培养板,置培养箱中孵育4h后,弃去[2,3]治疗子宫内膜癌、卵巢癌的报道。本研究采用多上清液,加入二甲基亚砜200
,l室温震荡8min,使种方法观察米非司酮对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋其彻底溶解,于酶标仪570nm波长处测其吸光度A亡的调控作用,为宫颈癌的防治寻找新的途径。值,计算出抑

6、制率(IR)。同法重复实验3次。抑制1
资料与方法率(IR)=(1-实验组A值/对照组A值)
100%。1.1
一般资料
人宫颈癌Hela细胞由河北医科大1.2.3
光学显微镜观察细胞形态
调整细胞密度4学惠赠;米非司酮由浙江仙居药业有限公司惠赠;至3
10个细胞/m,l接种到预置盖玻片的24孔培MTT购自北京中山公司;细胞凋亡检测试剂盒为北养板中,每孔1m。l置于培养箱内培养,至对数生长京华美公司产品。期,更换培养液,实验组分别加入终浓度为10、20、40
mol/L的米非司酮。同样设对照组。72h后取出1.

7、2
方法盖玻片,Gimsa染色,光镜下观察细胞形态。1.2.1
细胞培养
常规方法复苏冻存的人宫颈癌1.2.4
透射电镜观察细胞形态
将细胞按照上述Hela细胞,接种于含10%胎牛血清RPMI-1640培养密度接种于培养瓶中,四种浓度的米非司酮作用72液的培养瓶中,置37
、5%二氧化碳饱和湿度培养h后,收集细胞,4%戊二醛前固定,清洗后1%锇酸箱内培养,密切观察细胞生长情况,待细胞生长至后固定,常规脱水,浸透,环氧树脂包埋,制成脂块,70%融合时(约2~3d),EDTA消化传代,制成单细切成超薄切片,透射电子

8、显微镜观察细胞形态。胞悬液,以备实验用。1.2.5
TUNEL法检测细胞凋亡
按照光学显微镜

作者单位:050000石家庄,河北医科大学第二医院妇产科观察细胞形态方法获得细胞爬片,置于培养箱内培
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中国综合临床2006年9月第22卷第9期
ClinicalMedicineofChina,September2006,Vo.l22,No.9养,至对数生长期,更换培养液,加入药物。药