米非司酮对人宫颈癌hela细胞生长及其nf

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1、米非司酮对人宫颈癌HeLa细胞生长及其NF【关键词】宫颈肿瘤;人宫颈癌HeLa细胞株；米非司酮；核因子-κBp65Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofmifepristoneoncellproliferationandtheexpressionofNF-κBp65ofhumancervicalcarcinomacelllineHeLa.MethodsHumancervicalcancinomacelllineHeLaifepristone(5,10and20μmol/L)onHeLacelllineetho

2、dedtoexaminetheeffectofmifepristoneontheexpressionofNF-κBp65proteinofHeLacellline.ResultsThreedifferentconcentrationsofmifepristoninhibitedtheproliferationofHeLacellsinadose-dependingmanner.Theinhibitionbymifepristonereachedaplateauat20μmol/L.TheexpressionofNF-κBp65ifepristoneinH

3、eLacells.ConclusionMifepristonehasasignificantinhibitioneffectonthegroacelllineHeLainvitroandcandos;humancervicalcarcinomacelllineHeLa;mifepristone;NF-κBp65米非司酮(mifepristone,MIF)是20世纪80年代由法国RousselUclaf药厂人工合成的抗孕激素药物，目前在临床上主要用于终止早孕、引产等。但近年研究发现，MIF还具有抗肿瘤、增强抗癌药物疗效等其他临床新用途；核因子-κB(nuc

4、learfactorκB,NF-κB)是一种具有多向调节功能的核转录因子，它参与细胞的增殖、凋亡和癌基因的转录调控，并被证实和宫颈癌的发生发展密切相关［1-2］，NF-κBp65则是NF-κB在体内发挥生理功能的主要亚单位之一。目前，关于MIF对人宫颈癌HeLa细胞生长影响及其与NF-κBp65蛋白表达的关系尚少见报道，为此我们设计了此实验，研究不同浓度的MIF对人宫颈癌HeLa细胞生长及其NF-κBp65蛋白表达的影响，探讨MIF对宫颈癌的治疗作用及其可能的作用机制，为宫颈癌的防治寻找新途径。1材料和方法1.1材料人宫颈癌HeLa细胞株（中国医学科学院

5、血液病研究所，天津）；MIF纯粉剂（浙江仙琚制药股份有限公司）；DMEM干粉（美国Gibco公司）；MTT（美国Amersco公司）；NF-κBp65抗体（碧云天生物技术研究所）。1.2方法1.2.1细胞培养常规复苏冻存的宫颈癌HeLa细胞，接种于盛有DMEM培养液（含10%胎牛血清、105U/L青霉素、105U/L链霉素）的培养瓶中，细胞于培养液中在37℃、体积分数5%CO2、饱和湿度培养箱内培养，隔日更换新培养液1次。平均3～4天传代1次。1.2.2实验分组将培养的HeLa细胞随机分为用药组和对照组。用药组：分为3个剂量组（n=6），分别含有浓度为5

6、、10、20μmol/L的MIF，各组DMEM培养液中乙醇终浓度小于0.2%，含有7%胎牛血清。对照组（n=6）：培养液中不含MIF，只含与用药组相同浓度的乙醇和胎牛血清。1.2.3MTT法检测MIF对HeLa细胞增殖的影响收集对数生长期细胞，制备成单细胞悬液，以每孔8000个细胞接种到96孔培养板中，24h后观察细胞已贴壁，分组施加药物干预。分组情况如上所述，每组设6个平行孔，继续培养72h，每孔加入5g/L的MTT溶液20μl，孵育4h，弃上清液，每孔加入150μl二甲亚砜，低速振荡30min，用酶标仪在492nm处测定光密度(D值)。按下列公式计算

7、抑制率：抑制率=(1-用药组D值/对照组D值)×100%。1.2.4TT法结果显示，与对照组相比，3种浓度的MIF作用72h后均抑制了宫颈癌HeLa细胞的增殖，抑制率随MIF剂量的增加而增加，作用呈剂量依赖性；用药各剂量组与对照组相比以及用药各剂量组之间两两比较，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。见表1。表1MIF对HeLa细胞增殖的影响用药各剂量组与对照组比较及用药组间两两比较：P＜0.012.2MIF对HeLa细胞NF-κBp65表达的影响IF对NF-κBp65蛋白表达下调作用明显增强，且用药各剂量组之间的差异均具有统计学意义(P＜0.01)。见

8、图1、表2。3讨论3.1MIF对HeLa细胞体外生长抑制作用MIF是目前惟一用于