基因转染rp105抑制tlr4对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护及机制研究

《基因转染rp105抑制tlr4对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号R392密级公开UDC硕士学位论文基因转染RP105抑制TLR4对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护及机制研究学位申请人：李馨欣学科专业：免疫学指导教师：杨俊教授二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineProtectiveeffectsofRP105genetransferonmyocardialIschemia-reperfusioninjuryviaTLR4pathwayandthemechanismresearchinRat

2、sGraduateStudent:LiXinxinMajor:ImmunologySupervisor:Prof.YangJunChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：

3、三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：本项目通过构建携带RP105基因的复制缺陷型重组腺病毒载体，间接冠脉在体转染

4、大鼠心肌，使RP105在心肌组织高表达，在大鼠在体心脏缺血再灌注模型中，以TLR-4信号通路为切入点，从基因表达、蛋白合成等多个层次研究RP105对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其分子机制。方法：SPF级雄性SD大鼠40只，随机分为4组(n=10)：生理盐水+假手术组(Sham组，只穿线不结扎)、生理盐水+缺血再灌注组(I/R组）、Ad-RP105+缺血再灌注组(Ad-R组)、Ad-GFP+缺血再灌注组(Ad-G组)。重组腺病毒间接冠状动脉转染大鼠心肌，3d后建立心肌缺血再灌注模型。术后2h空气栓塞法处死大鼠，采用光镜观察心肌组织的病理形态学改变；Evansblue和TTC双

5、染法估测心肌梗死面积；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定心肌TNF-α和IL-6的含量；Real-timePCR和Westernblot检测心肌RP105、TLR-4、MyD88、NF-κBmRNA水平和蛋白表达情况。结果：(1)采用携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)成功转染大鼠在体心肌，结果显示，大鼠生存状态良好，心肌转染效率达91.5%。(2)光镜结果显示，Sham组心肌超微结构及组织形态正常；IR组与Ad-G组心肌损害严重，而经目的基因RP105处理过的Ad-R组心肌变性坏死得到显著改善。(3)与IR组相比，Ad-R组心肌梗死面积明显减少(41.3±1.5%v

6、s26.7±1.3%,P<0.05)，差异有统计学意义；G组心肌梗死面积(39.9±1.2%)变化并无统计学意义。(4)与Sham组相比，Ad-R组RP105mRNA及蛋白表达均显著增加(4.080vs1,0.374vs0.149,P<0.05)，而在I/R组与Ad-G组，其表达明显下调，P<0.05，差异有统计学意义。(5)与Sham组比较，缺血再灌注后各组心肌组织中TLR-4、MyD88、NF-κBmRNA及蛋白表达均增加，其中I/R组与Ad-G组显著升高，差异有统计学意义；与缺血再灌注组IR组比较，Ad-R组显著降低，差异有统计学意义。(6)构建缺血再灌注损伤模型后，心肌组

7、织中TNF-α和IL-6表达水平升高，IR组与Ad-G组较Sham组显著上升(P<0.05)；与IR组相比，Ad-R组心肌组织中TNF-α和IL-6表达水平受到一定抑制(P<0.05)，差异有统计学意义。结论：(1)复制缺陷型腺病毒对于大鼠生理功能并无明显影响，安全有效；(2)构建携带有目的基因RP105的复制缺陷型病毒，进行大鼠在体心肌转染，可显著提高心肌组织中RP105mRNA及蛋白表达；(3)心肌细胞RP105高表达，可显著减轻心肌缺血再灌注损伤；(4)TLR-4信号通路在