hhsp70基因冠脉转染对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用

《hhsp70基因冠脉转染对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文中文摘要摘要目的：研究hHSP70基因经冠脉转染对大鼠心肌抗缺血再灌注损伤的效应，并探讨其可能机制．方法：(1)构建复制缺陷型重组腺病毒：采用分子克隆手段获得携带增强型绿色荧光蛋白0iOFl')基因的重组质粒、携带人热休克蛋白70的重组质粒，以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Adv．EGFP、Adv-hHsp70，在293细胞内分别扩增，应用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒．经氯化铯纯化滴度分别为，Adv-EGFP，2．O×109PfIl／m；Adv-Hsp70：2．5x10∞Pfu／m1．(2)选择50只S-D大鼠随机分成5组(n-10)。大鼠左侧开胸，暴露心脏

2、及升主动脉和肺动脉根部，用无损伤血管钳钳夹于主、肺动脉根部，阻断循环10秒钟，同时用27号针头于左心尖部注射各组相应试剂0．1ml至左心室腔，使之在密闭的冠脉循环内分布。第1、Ⅱ、Ⅲ组仅注射0．1ml生理盐水；第Ⅳ、V组分别注射含Adv-EGFP、adv-Hhsp70(1X101㈨的生理盐水；关胸苏醒后，稳定4天，使经冠脉转染的基因充分表达于心肌．(3)冠脉转染4天后，再次暴露胸腔，在动脉圆锥与左心耳根部间结扎冠状动脉左前降支(LAD)。结扎45min后，松开缝线使冠状动脉再通180min。I组只穿线不结扎。Ⅲ组在LAD结扎5min后开放5min，并重复3次，然后再行45min缺

3、血、180min再灌注．(4)采用Evan'sBlue和TIC双染色法后利用image-proplus5．0测定心肌梗死面积：光学显微镜下观察心肌的炎症改变；Western硕士学位论文中文摘要Blotting免疫印迹测定心肌基因表达的改变并利用bandscan4．5进行灰度测量进而统计计算。结果：(1)经缺血预处理或hHSP70转染后的心梗范1弱(27．13±2．7％，27．88+5．3％，)较缺血再灌注组和腺病毒对照组(39．72_+4．2％，32．734-7．O％)明显缩小。hHSP70转染组与缺血预处理组没有统计学差剐。(2)hHSP70过量表达能够增加Bcl-2表达及减少

4、caspase-3活化态的生成进。(3)hHSP70过量表达能减少NF-rJ3的活化。(4)心肌表达的蛋白发生相应的交化，hHSP70转染组hHSP70过量表达，，Bcl-2表达增加，活化的caspase-3减少。结论：(1)hHSP70转染能通过HSFT0的过表达，增加Bcl-2表达，减少caspase一3的活化及其他机制来抑制凋亡。(2)姐SP70转染能通过抑制NF-r,B的表达及活化及其他机制起到抑制炎症作用。(3)在HSP70过表达的情况下对心肌梗死与缺血预处理组没有统计学差别，可以起到与缺血预处理急性期同等程度的心肌的保护作用。关键词缺血再灌注损伤，腺病毒载体，hHSP

5、70，凋亡，炎症n堡圭堂垒垒奎萎塞塑墨Objectives-ToobservetheprotectiveeffectagainstmyocardialischemiareperfusioninjuryaftertransferofhumanHSP70gentviacoronaryarteryandtoinvestigatethepotentialmechanisms·Methods：(1)Constructionofthereplication-deficientrecombinantadenovims：RecombinantplasmidsPDC-EGFP(containing

6、enhancedgreenfluorescenceproteinEGFPgene)，PDC-hsp70(containinghumanlISPgene)．RecombinantadenovirusAdv-EGFP,Adv-hspT0wereproducedbyhomologousrecombinantin293cells，amplifiedalsoin293cellsonalargescale，andpurifiedbyultracentrifugationinQastepgradientsolutions．Theconcentrationofrecombinantadenovi

7、rusAdv—EGFPpurifiedbyultracentfifugationinCsClstepgradientsolutionsis2．0x109Pfu／ml；thatofAdv-hsp70is2．5x1010Pfu／m1．(2)50S-Dratswererandomlydividedinto5groups(I埠10)．Theleftthoracotomywasperformedandthepericardiumopenedwiththeexposureoftheheart