rp105抑制tlr4信号通路对大鼠心肌缺血再灌注凋亡损伤的保护作用及其机制研究

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1、分类号R5密级公开UDC硕士学位论文RP105抑制TLR4信号通路对大鼠心肌缺血再灌注凋亡损伤的保护作用及其机制研究学位申请人：郭鑫学科专业：内科学指导教师：杨俊教授二○一五年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineAnti-apoptoticpotencyofRP105onmyocardialischemiareperfusioninjuryviasuppressionofTLR4signalin

2、gpathwaysandthemechanismresearchinratsGraduateStudent:XinGuoMajor:InternalMedicineSupervisor:Prof.JunYangChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2015三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献

3、的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：I内容摘要目的：探讨RP105心肌过表达对TLR4信号通路介导的心肌缺血再灌注凋亡损伤的保护作用，并探讨其分子机制。方法：将40只SPF级雄性SD大鼠(220-250g)随机分为4组(n=10)：生理盐水+假手术组(Sham组)、生理盐水+缺血再灌注组(I/R组)、Ad-EGFP+缺血再灌注组(Ad-E组)、Ad-EGFP-RP105+缺血再灌注组(Ad-E-R组)。采用多点注射法，将重组腺病毒载体或生理盐水在体转染大鼠心肌，转染后3天

4、构建心肌缺血再灌注损伤模型。缺血30min再灌注4h后空气栓塞法处死大鼠，采用免疫荧光及Real-timePCR法检测转染基因EGFP、RP105表达；Evansblue+TTC双染法检测大鼠心肌梗死面积；TUNEL法检测大鼠心肌凋亡指数；Westernblot检测线粒体相关的凋亡级联反应Bax、cytochromec、Bcl-2、caspase-9、cleavedcaspase-3表达情况以及RP105、TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表达。结果：(1)重组腺病毒载体Ad-

5、EGFP、Ad-EGFP-RP105转染心肌组织3天后，转染基因EGFP与RP105在心肌成功过表达。(2)与Sham组相比，I/R组、Ad-E组、Ad-E-R组心梗面积、心肌凋亡指数均显著增加(p<0.05)；线粒体依赖性凋亡级联反应中促凋亡分子Bax、Cyt-c、caspase-9、cleavedcaspase-3表达均明显增加(p<0.05)，而抗凋亡分子Bcl-2表达明显降低(p<0.05)；TLR4信号通路中TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表达水平均显著增加(p<0

6、.05)。(3)与I/R组、Ad-E组相比，Ad-E-R组心梗面积、心肌凋亡指数显著降低(p<0.05)；线粒体依赖性凋亡级联反应中促凋亡分子表达明显降低，而抗凋亡分子表达显著升高；TLR信号通路中TLR4、p-P38MAPK、p-c-Jun/AP-1蛋白表达均明显降低(p<0.05)。(4)I/R组、Ad-E组两组间心梗面积、心肌凋亡指数、线粒体依赖性凋亡级联反应中促凋亡分子、抗凋亡分子表达水平以及TLR4信号通路中TLR4、P38MAPK、p-P38MAPK、c-Jun/AP-1、p-c-Jun/AP-1蛋白表达水平均无统计学差异(p

7、>0.05)。(5)I/R组、Ad-E组、Ad-E-R组三组间P38MAPK及c-Jun/AP-1蛋白表达无统计学差异(p>0.05)。此外，p-P38/P38MAPK、p-c-Jun/c-Jun相对表达率比值结果表明：与Sham组比较，I/R组、Ad-E组、Ad-E-R组比值明显升高(p<0.05);与I/R组、Ad-E组相比，Ad-E-R组比值显著降低(p<0.05)；I/R组、Ad-E组比值升高程度无显著性差异(p>0.05)。结论：(1)Ad-EGFP及Ad-EGFP-RP105重组腺病毒成功转染心肌组织，可显著提高转染基因EGF

8、P、RP105mRNA与蛋白表达；(2)RP105心肌过表达可显著降低缺血再灌注心肌损伤，降低再灌注心肌细胞凋亡；(3)心肌缺血再灌注中TLR4信号通路激活，促进下游信号分子P38MAPK及转