宫颈癌中rap1gap表达下调机制研究

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1、中图分类号密级宫颈癌中RaplGAP表达下调机制的研究ThestudyonMolecularmechanismofRaplGAPdown-regulationincervicalcarcinoma计：学位论文：43页表格：2个插图：9幅指导教师：赵春艳教授申请学位级别：硕士学位培养单位：大连医科大学孙悦学科(专业)：临床检验诊断学完成时间：二O一三年四月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，

2、也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：切、·}∥签字日期：唑年兰月』日关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密口

3、，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：砀一1．妙日期：pj弓年争月f习目导师签名：之苎静分妙日期：p侈年y月∥日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)日IJ舌””⋯”⋯”⋯“⋯⋯⋯⋯“⋯”“””⋯⋯一”””⋯⋯⋯”一’(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．材料···⋯·⋯⋯⋯··⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯一·⋯⋯．．”⋯一一“”一一⋯71．1细胞及细胞培养相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．2细菌培养相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．3质粒转化与提取相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．4转染相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．5westernblot相关试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．6其它试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8’1．7实验试剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．8主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯102．方法⋯⋯·⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一。102．1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O2．2质粒的转化及提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．3细胞总RNA提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．4琼脂糖凝胶电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOQ⋯⋯⋯l22．5E6的逆转录．聚合酶链式反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．6MGl32浓度对细胞增殖的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．7脂质体转染及共转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IOOIO0132．8Westernblot·····⋯⋯⋯·······⋯··⋯·⋯

6、··⋯··⋯·······⋯·142．9统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(．--)结果········⋯··⋯····⋯·⋯···⋯⋯···⋯·⋯·⋯····⋯···⋯···161．HPVl6E6降低内源性RaplGAP的蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．1质粒制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．2HPVl6E6对内源。1哇RaplGAP表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．HPVl6E6通过泛素蛋白酶体通路降解RaplGAP⋯⋯⋯⋯182．1细胞转染效率检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．2MGl32浓度的的确定⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202．3HPVl6E6通过泛素蛋白酶体途径降解外源性RaplGAP蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯21(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43大连医科大学硕士

8、学位论文宫颈癌中RaplGAP表达下调机制的研究硕士生姓名：孙悦指导教师：赵春艳教授专业名称：临床检验诊断学摘要目的：探讨宫颈癌中RaplGAP表达下调机制，为进一